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來源: 發(fā)布時間:2023-04-26

為獲得外泌體的大小,、濃度,、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息,可以通過電鏡,、動態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀,、蛋白質(zhì)免疫印跡,、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對外泌體進(jìn)行表征,。通過電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息,,不同類型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同,得到的外泌體形態(tài)存在差異,。例如,,在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中,,外泌體呈現(xiàn)囊泡獨(dú)有的茶托形,,可能由于樣品在固定或染色過程中極度脫水,導(dǎo)致外泌體塌陷所致,。與之相反,,在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形,由于不會脫水變性,,所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài),。另外,由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率,,也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度,、粒徑分布等信息。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,。乳液提取試劑盒銷售

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建立記錄各論文實(shí)驗(yàn)條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一,。一方面,隨著EV研究倍受世界矚目,,各國啟動了大型研究項(xiàng)目,。美國啟動NIH戰(zhàn)略性大型項(xiàng)目(ExtracellularRNACommunication),國際厲害性學(xué)會——Gordon和KeystoneSymposia也從2016開始成立會議小組,。受到歐洲藥物研究開發(fā)公司“創(chuàng)新藥物倡議組織(IMI)”的支持推進(jìn)的CANCER-ID項(xiàng)目,,也包含EV研究在內(nèi)。2017年日本選定了EV研究為文部科學(xué)省研究開發(fā)戰(zhàn)略的目標(biāo)之一,,期待會加速今后的研究發(fā)展,。無論如何,,今后EV研究的根本就是必須有強(qiáng)有力的研究方法和技術(shù),而PS親和法有望成為其中之一,。dii染料標(biāo)記外泌體外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物,。

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結(jié)果表明,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA,。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力,,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體,。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,,也通過運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明,,這項(xiàng)技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評價,,有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類,。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體,,給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年,,隨著國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會的成立,、世界性研究者研討會的舉辦,提案MISEV指南作為國際標(biāo)準(zhǔn),,計劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請務(wù)必閱讀這些方針,。

Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時發(fā)現(xiàn),加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強(qiáng)的抗種瘤功效,,且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,,由此可以證明,外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性,。到目前為止,外泌體在肺病醫(yī)治方面的研究主要集中于免疫壓制,,有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在醫(yī)治靶點(diǎn)的探索,。已有的研究表明外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域早日得到突破,,造福更多的患者,。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白,、RNA,、DNA、氨基酸和代謝物,。

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在免疫系統(tǒng)中,,淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞,、肥大細(xì)胞等均可以產(chǎn)生外泌體,。研究表明免疫細(xì)胞來源的外泌體能夠明顯影響機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,包括調(diào)節(jié)抗原呈遞,、免疫激huo,、免疫監(jiān)督等。不同免疫細(xì)胞來源的外泌體功能不同,,以樹突狀細(xì)胞(該細(xì)胞具有免疫刺激能力,是目前能夠激huo初始T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞)來源的外泌體為例,,其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細(xì)胞的成熟狀態(tài),。成熟的樹突狀細(xì)胞外泌體內(nèi)包含能夠直接激huoT細(xì)胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ,共刺激分子如CD40,、CD8、CD86和熱激蛋白,,這些分子使樹突狀細(xì)胞來源的外泌體具有抗原呈遞,、調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的生物功能。外泌體的提取的方式:超速離心法,。體液外泌體提取試劑盒步驟

外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體,。乳液提取試劑盒銷售

細(xì)胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,,包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來控制的,。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏,、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號或融合,,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中,。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域。乳液提取試劑盒銷售

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