中流細(xì)胞分泌的外泌體可以通過體液進(jìn)入特定qi官,,建立有利于ai細(xì)胞生長的微環(huán)境,,包括促進(jìn)受體細(xì)胞上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、引發(fā)炎癥,、促進(jìn)血管生成,,為ai細(xì)胞的擴散形成有利條件。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)中流細(xì)胞外泌體能夠引導(dǎo)ai癥轉(zhuǎn)移至特定qi官,,在膜表面特異性整合素的作用下,,中流細(xì)胞外泌體首先在特定的qi官累積,引起受體qi官產(chǎn)生炎癥,、生成血管,,形成有利于中流轉(zhuǎn)移的微環(huán)境,使得中流細(xì)胞更容易轉(zhuǎn)移至該qi官,。Maji等揭示了惡性中流細(xì)胞外泌體中的AnnexinⅡ蛋白能夠促進(jìn)血管生成,,為中流轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的微環(huán)境。外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng),。外泌體標(biāo)志物蛋白
外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細(xì)胞的增殖,、再生和遷移等生理過程,在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用,,如肝病,、肝硬化、肝纖維化,、酒精性脂肪肝等,。抑制或阻止外泌體的分泌,或許是治理肝臟疾病的一種新型策略,。此外,,外泌體具有穩(wěn)定性和生物安全性,也可以用作載體攜帶改造的基因或藥物,,或用作疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)殺死瘤細(xì)胞,。外泌體會起到一定的保護作用,抵抗病毒的作用,。與HCV類似,,HBV患者的血清中分離到的外泌體同樣攜帶HBV核酸分子和蛋白質(zhì)。HBV陽性的外泌體會主動轉(zhuǎn)移HBV到肝細(xì)胞中,。外泌體中HBV核酸分子還會抑制RIG-1和下游信號通路,,導(dǎo)致NK細(xì)胞功能紊亂,。遼寧外泌體攝取膜受體的識別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,。
尋找肝臟疾病的新型分子標(biāo)志物一直是研究熱點,,也是難點。不同肝臟疾病中,,細(xì)胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異,。這些不同生理狀態(tài)下外泌體所攜帶的特異性蛋白分子、miRNA等,,是潛在的分子診斷和預(yù)后標(biāo)志物,。肝細(xì)胞患者中,血清外泌體miR-21,、-18a,、-221、-222和miR-224明顯上升,,miR-101,、-106b、-122和miR-195明顯下降,。而HCC患者肝移植復(fù)發(fā)后,,血清外泌體miR-718水平明顯下降。除外泌體外,,微泡也有可能作為新型標(biāo)志物,,研究發(fā)現(xiàn)HCV患病者中CD4+和CD8+T細(xì)胞來源的微泡含量上升;而肝臟干細(xì)胞分泌的微泡中多種miRNAs上調(diào),。
外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷,,成熟于多囊泡胞內(nèi)體,終于膜融合,。細(xì)胞通過內(nèi)吞作用產(chǎn)生小囊泡,,小囊泡融合形成早期胞內(nèi)體(earlyendosome),在多個蛋白的協(xié)同調(diào)控下,,早期胞內(nèi)體出芽形成含有多個腔內(nèi)小囊泡的多泡體(multivesicularbodies,,MVB),這個過程中這些腔內(nèi)小囊泡(intraluminalvesicles,,ILVs)會裝載各種核酸和蛋白質(zhì)等分子,,泡內(nèi)體較后在GTPase家族中RAB酶的調(diào)節(jié)下與細(xì)胞膜融合。隨后,,這些小囊泡會被釋放到細(xì)胞外,,稱為外泌體。外泌體是通過細(xì)胞內(nèi)吞細(xì)胞膜融合主動排除的物質(zhì),,大小均勻,,而微泡是由細(xì)胞直接出芽脫落生成,,大小不均一。外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障(如細(xì)胞質(zhì)膜和血/腦屏障)的能力,。
外泌體的提取分離方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),,純度也受到質(zhì)疑;此外,,重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量。2,、密度梯度離心:在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,,耗時。外泌體并作為癥狀早期診斷技術(shù),,應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究,。組織外泌體提取試劑盒步驟
外泌體的提取的方式:免疫磁珠法。外泌體標(biāo)志物蛋白
外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡,,其大小為30-150nm,,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),,參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液,、唾液、尿液,、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣,。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞,調(diào)控細(xì)胞生理活動,。同時,,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用;此外,,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送,。外泌體標(biāo)志物蛋白
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