外泌體研究背景：胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,，主要由微囊泡,、凋亡小體,、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡，直徑為30~150nm,，密度1.10~1.18g/ml,，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,，存在于血液,、唾液、尿液等多種體液中,。越來(lái)越多的研究證實(shí),，外泌體可以通過(guò)細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸,、蛋白質(zhì),、脂質(zhì)等特定物質(zhì)，發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中,、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用,。對(duì)外泌體的分析和檢測(cè)可以輔助疾病的早期診斷,、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后分析。外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸,、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。在免疫系統(tǒng)中,，據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過(guò)外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制,。福建外泌體芯片

外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì):(1)與正常細(xì)胞相比，病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異,。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體,。(2)由于特殊的生成方式,，外泌體的組成不同于來(lái)源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源,、結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸方式,，有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機(jī)制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過(guò)胞吐的過(guò)程進(jìn)入血液,、尿液等體液,，囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶,、核酸酶等干擾,，有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性，通過(guò)對(duì)此類體液進(jìn)行分析可以實(shí)現(xiàn)疾病的無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)檢測(cè),。血液外泌體粒徑檢測(cè)外泌體不只可作為疾病診斷的生物標(biāo)志,，而且可作為天然的藥物傳遞載體。

外泌體調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能,，延長(zhǎng)毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)期,，同時(shí)活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊，使其提前進(jìn)入新的生長(zhǎng)周期,，實(shí)現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長(zhǎng),。骨衰老小鼠注射外泌體試驗(yàn)證明：年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機(jī)。來(lái)源于脂肪組織中的干細(xì)胞分泌一些信號(hào)分子和生長(zhǎng)因子,，可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)周期的毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞進(jìn)行分化,，向上遷移生成表皮細(xì)胞和皮脂腺，向下遷移生成毛母細(xì)胞,。毛發(fā)根部的囊的生長(zhǎng)周期決定毛發(fā)的生長(zhǎng)周期,，而毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度，外泌體靶向調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的功能,。

流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析,。但是由于外泌體的粒徑小,、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積,、增強(qiáng)反射,，操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM),，將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm,，能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè)，并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè),，目前該儀器已商品化,。外泌體被工程化改造后,，具有靶向特定細(xì)胞類型或組織的功能。

外泌體作為細(xì)胞間信使較早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,，是直徑為30~150nm,，密度為1.10~1.18g/ml的細(xì)胞外囊泡，攜帶豐富的遺傳信息,，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、細(xì)胞遷移、瘤子新生血管生長(zhǎng)和瘤子微環(huán)境形成等過(guò)程,。由于現(xiàn)存的分離技術(shù)是基于外泌體的大小,、結(jié)構(gòu)和膜蛋白的親和捕獲，比較難完全將其與其他囊泡和大分子蛋白質(zhì)復(fù)合體區(qū)分開(kāi),，分離出的外泌體蛋白濃度通常會(huì)被高估,，并且不同亞型外泌體之間可能會(huì)有不同蛋白質(zhì)特征，所以對(duì)分離的外泌體進(jìn)行鑒定對(duì)于后期研究至關(guān)重要,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。細(xì)胞外泌體通用技術(shù)要求下載

所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體。福建外泌體芯片

血清和血漿為常規(guī)檢測(cè)樣本,，具有微創(chuàng)取樣的優(yōu)點(diǎn),，是診斷疾病的理想樣本。血液中外泌體能夠作為胰腺ai,、胃ai,、肺ai和阿爾茲海默等疾病的早期診斷和療效評(píng)價(jià)提供潛在標(biāo)志物。血液外泌體來(lái)源的疾病標(biāo)志物主要包括蛋白質(zhì)和miRNA兩類,。Melo等發(fā)現(xiàn)利用胰腺ai細(xì)胞外泌體表面的磷脂酰肌醇聚糖-1(GPC1)能夠?qū)崿F(xiàn)胰腺ai早期診斷,，利用該方法對(duì)血清中包含GPC1的外泌體進(jìn)行檢測(cè)，能夠高特異性(100%),、高靈敏度(100%)地區(qū)分胰腺ai患者(246例)和正常人(20例)以及慢性胰腺炎患者(37例),。福建外泌體芯片

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