外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個關(guān)鍵的檢查點：ILV的形成,，阻止MVEs的降解以及MVEs和細胞膜的融合，這三個檢查點都包含在內(nèi)體相關(guān)的囊泡運輸過程中,。RABGTPase定位到特定膜結(jié)構(gòu)的表面,，通過招募效應因子來調(diào)節(jié)相應膜結(jié)構(gòu)的囊泡運輸，例如,，在內(nèi)體溶酶體運輸網(wǎng)絡(luò)中,，RAB5調(diào)節(jié)早期內(nèi)體的形成及相互融合；內(nèi)體膜上RAB5到RAB7的轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)早期向晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變,；RAB7調(diào)節(jié)晚期內(nèi)體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs,；RAB27調(diào)節(jié)MVEs與細胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內(nèi)吞的膜蛋白,，特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體,，定位到內(nèi)體和MVEs，通過MVEs和溶酶體融合來進入溶酶體降解,，此過程受多種RABGTPases和ESCRT復合體的調(diào)控,。外泌體大小不均的原因可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷，導致流體和固體的總含量不同,。細胞外囊泡和外泌體

血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導致的,。–80°C保存被公認是保存各種生物標本如尿,、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體,。4°C保存雖然容易導致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞,。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運輸過程中有時很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護劑,海藻糖可以提供生物保護作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì),、細胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細胞外囊泡的損失等,。牛奶提取試劑盒分類突狀細胞釋放的外泌體可以強化殺傷性T細胞對癥狀細胞的特異性反應。

膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來越來越受關(guān)注的問題,。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復雜的信息有助于這種興趣的興起,。但是，也已經(jīng)清楚,，不同類型的分泌囊泡共存,，具有不同的細胞內(nèi)起源和形成模式，因此可能具有不同的組成和功能,。外泌體是分泌囊泡的一種亞型,。它們在真核細胞內(nèi)的多泡小體中形成，并且當這些多泡小體與質(zhì)膜融合時分泌到細胞外,。有趣的是,，不同的分子家族已被證明參與細胞內(nèi)形成外泌體及其隨后的分泌，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型,。

外泌體是新型治理劑,，惡性瘤細胞往往能夠通過分泌大量外泌體抑制宿主固有免疫,。對外泌體的質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn),，惡性瘤細胞的外泌體含有大量活化型的表皮生長因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）,，可以抑制宿主細胞α型干擾素(IFN-α)的產(chǎn)生。這就解釋了為什么部分瘤患者固有免疫低下,，也為晚期病癥患者的治理提供一個新的策略和理論依據(jù)。除了瘤,，外泌體在其他疾病如心血管疾病等的診斷和治理的相關(guān)臨床試驗也在世界范圍內(nèi)開展中。外泌體研究使用血漿樣本進行實驗較好,。

細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡,。這些細胞外囊泡（EVs）表示了細胞間通訊的一個重要模式，作為膜和細胞溶質(zhì)蛋白,、脂質(zhì)和RNA細胞之間傳遞的載體,。泌體是細胞內(nèi)源性的小囊泡,，由大多數(shù)細胞分泌。在抗原呈遞細胞中的外泌體發(fā)揮作用的報道后,，人們對外泌體的興趣增強，并且觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應答。在過去幾年中,，有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌,，并討論了其潛在的生物學功能。然而,，我們對于EV形成的分子機制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索,。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機制,。外泌體被認為是疾病的生物標志物和預后因子,，具有重要的臨床診斷和治理意義。上海干細胞外泌體

外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,，多角度進行鑒定。細胞外囊泡和外泌體

為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture?ExosomeIsolationKitPS）提取高純度細胞外囊泡,。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質(zhì),，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導向細胞膜內(nèi)側(cè),，暴露在外泌體膜外側(cè)3）,。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4）,。基于上述知識,，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學醫(yī)學系免疫學華山教授共同開發(fā),，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法,。細胞外囊泡和外泌體

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