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外泌體提取試劑盒應(yīng)用

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-08-08

外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡,。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對(duì)相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能,。作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門,。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍,,但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),,關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多,。例如,,外泌體提純方法中,,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì),,給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙??贵w親和法和密度梯度離心法,,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,,無法分析外泌體具有的生理功能,,也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測(cè)法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測(cè)的一般方法,,又存在檢測(cè)時(shí)需使用大量外泌體和難以檢測(cè)到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細(xì)胞的增殖,、再生和遷移等生理過程,在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用,。外泌體提取試劑盒應(yīng)用

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研究者利用電穿孔法對(duì)外泌體進(jìn)行DOX的負(fù)載,,進(jìn)行體內(nèi)抗中流效果的研究,。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,,負(fù)載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對(duì)中流的抑制效果遠(yuǎn)優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX,,其不僅水溶性低,,而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合,,從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別捕獲,起不到理想的抗中流效果,。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護(hù)DOX,可以提高DOX水溶性,,避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉,,提高靶向性,,從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性,,起到更好的抗中流效果。植物外泌體攝取有關(guān)外泌體分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。

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外泌體的提取方法:超速離心法,,這是外泌體提取比較常用的方法,。超速離心法得到的外泌的體量比較多,,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),,也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過濾離心法,,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),,不會(huì)影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題,。密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期的準(zhǔn)備工作繁雜,,比較耗時(shí),,量少。

各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),,由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞,期望開發(fā)利用該特征的新型DDS,。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,,同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。另外在從體液中提取外泌體后,,體液可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存,,因此外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記,。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出,,特別是血液中釋放的病細(xì)胞來源的外泌體,,其與正常細(xì)胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目,并作為癥狀早期診斷技術(shù),,應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟,、前列腺疾病,、膀胱疾病的新型診斷標(biāo)記,,髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物,。日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”,。

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Knepper等通過對(duì)透射電鏡得到的200個(gè)囊泡進(jìn)行粒徑分析,,結(jié)果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35~40nm,磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5~1/10,。透射電鏡結(jié)合免疫金標(biāo)記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息,,有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機(jī)制與來源,。動(dòng)態(tài)光散射(dynamiclightscattering,,DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis,,NTA)都是利用光學(xué)手段獲得囊泡粒徑分布的方法,。兩者的不同之處在于動(dòng)態(tài)光散射通過檢測(cè)散射光的強(qiáng)度計(jì)算得到顆粒粒徑,,而納米顆粒跟蹤分析通過追蹤單個(gè)粒子的運(yùn)動(dòng)軌跡計(jì)算得到樣品濃度,、粒徑分布等信息,。外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷,成熟于多囊泡胞內(nèi)體,,終于膜融合,。外泌體的作用

隨著今后的研究發(fā)展,外泌體功能逐步清晰,,并擴(kuò)大臨床應(yīng)用,。外泌體提取試劑盒應(yīng)用

在利用外泌體運(yùn)輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中,,由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對(duì)PTX運(yùn)輸,,因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞,,而后將SR4987與PTX共混,,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,,研究其對(duì)體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響,。結(jié)果表明外泌體可以有效的運(yùn)載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047~0.095mg/mL之間時(shí)可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%,,這種抑制效果與純PTX對(duì)體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng),。外泌體提取試劑盒應(yīng)用

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