外泌體起源于多泡體,以細(xì)胞管腔內(nèi)囊泡的形式存在.細(xì)胞的胞吞形成帶有外源性抗體的內(nèi)體小泡,在高爾基體等細(xì)胞器的作用下形成早期核內(nèi)體,早期核內(nèi)體的囊膜內(nèi)陷、突入形成多個(gè)小囊泡,并選擇性的接受細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等成分,較終形成晚期核內(nèi)體,晚期核內(nèi)體與細(xì)胞膜融合,并將外泌體排出胞外,。這是一個(gè)連續(xù)而又復(fù)雜的過程,從內(nèi)體小泡到成熟外泌體,需要在各細(xì)胞器間傳遞并包裝,包括:TSG101,、Alix蛋白、CD63,、CD81,、神經(jīng)酰胺、膽固醇等,。外泌體的排出跟其他胞內(nèi)小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的調(diào)控,敲除細(xì)胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌體不能排出,且從高爾基體到晚期核內(nèi)體的囊泡運(yùn)輸不受影響,。外泌體本身的惰性相當(dāng)高,但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號(hào)傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能,。研究所提取試劑盒產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)
外泌體的miRNA或蛋白質(zhì)等遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān),,在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點(diǎn)或分子標(biāo)志物。對(duì)外泌體的研究,,將有利于闡述肝臟及其疾病的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制,,為尋求臨床可用的biomarkers和開發(fā)新的治理方法提供支持。外泌體可以通過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和miRNAs進(jìn)行細(xì)胞間交流,,從而作用于周圍的細(xì)胞并改變肝臟的微環(huán)境,。細(xì)胞內(nèi)多泡體(MVBs)與細(xì)胞膜融合,釋放內(nèi)部的外泌體到細(xì)胞外,,被其他細(xì)胞攝取,,通過細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞作用釋放攜帶的內(nèi)含物,在受體細(xì)胞中調(diào)控生理活動(dòng),。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長,、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過程,。血細(xì)胞提取試劑盒廠家外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細(xì)胞的增殖,、再生和遷移等生理過程,在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用,。
利用蛋白質(zhì)免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)可以對(duì)外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)進(jìn)行定性定量分析,。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經(jīng)典表征手段之一,操作時(shí)往往需要細(xì)胞裂解液作為陰性對(duì)照,。常用的外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白質(zhì)CD63,、CD81、CD9,、中流易感基因101蛋白(TSG101),、水通道蛋白2(AQP2,尿液中)和凋亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白(Alix)等,,內(nèi)參蛋白質(zhì)可以是肌動(dòng)蛋白(βActin)或甘油醛-3-磷酸脫氫酶,,陰性對(duì)照蛋白可以是阻抑素(PHB,,線粒體標(biāo)志蛋白)或鈣聯(lián)結(jié)蛋白Calnexin。在酶聯(lián)免疫吸附析法中,,外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質(zhì),,隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣,、耗時(shí)長的問題,,相比較而言,酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質(zhì)免疫印跡法更加快速,,適用于高通量分析,。
外泌體可以由體內(nèi)或體外培養(yǎng)的幾乎所有類型的細(xì)胞分泌,并廣fan存在于血漿、膽汁,、尿液,、母乳、唾液,、胸腔積液,、淋巴、胃酸,、支氣管肺泡灌洗液,、腦脊液、眼淚,、滑膜液,、羊水、腹水,、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中,。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù),分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù)、基于粒徑大小的分離技術(shù),、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù),、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù)。目前,,提取外泌體的方法主要有超速離心法,、PEG沉淀法。
Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),,加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強(qiáng)的抗種瘤功效,,且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,由此可以證明,,外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性,。到目前為止,外泌體在肺病醫(yī)治方面的研究主要集中于免疫壓制,,有效的外泌體藥物遞送平臺(tái)的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在醫(yī)治靶點(diǎn)的探索,。已有的研究表明外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域有著廣闊的前景,,期待外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域早日得到突破,造福更多的患者,。結(jié)果表明,,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA,。福建外泌體攝取
從外泌體中篩選的生物標(biāo)志物,,可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理,。研究所提取試劑盒產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)
外泌體(exosome)是多種活細(xì)胞經(jīng)過“內(nèi)吞–融合–外排”等一系列過程主動(dòng)向胞外分泌的直徑為30~150nm的雙層膜結(jié)構(gòu)細(xì)胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs),廣fan存在于血液,、尿液和唾液等生物體液中,并通常作為細(xì)胞間胞質(zhì)蛋白、核酸和脂質(zhì)的轉(zhuǎn)移載體發(fā)揮運(yùn)輸調(diào)控作用,被認(rèn)為是細(xì)胞間通訊的核xin部分,。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網(wǎng)織紅細(xì)胞分化的過程中被發(fā)現(xiàn),并于1996年由RAPOSO等證實(shí)能夠作為一種細(xì)胞間通訊結(jié)構(gòu)在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用后得到了廣fan關(guān)注,。近年來,隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學(xué)作用和功能被逐漸揭示,尤其是2015年MELO等發(fā)現(xiàn),外泌體Glypican-1蛋白可有效區(qū)分慢性胰腺炎與胰腺ai以來,外泌體作為疾病診斷,、預(yù)后預(yù)測標(biāo)志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)應(yīng)用也得到了迅速的推進(jìn),。研究所提取試劑盒產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)