所有真核細(xì)胞類(lèi)型包括造血細(xì)胞,、上皮細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和病癥細(xì)胞均可在培養(yǎng)條件下分泌外泌體,。體內(nèi)所有體液,,包括血液,、唾液、腦脊液,、腹水,甚至尿液中都可以分離得到外泌體,。這些外泌體傳輸多種信號(hào)分子,,包括蛋白質(zhì)、信使核糖核酸(mRNA)和非編碼核糖核酸(RNA),,其攜帶的分子可以被其他細(xì)胞吸收。因此,,外泌體可以將生物信息轉(zhuǎn)移到相鄰細(xì)胞,。這種細(xì)胞間通信不只涉及生理功能,還涉及一些疾病的發(fā)病機(jī)理,,包括瘤,、心血管疾病和神經(jīng)退行性疾病等。外泌體是一種由活細(xì)胞分泌的,,直徑約為40~160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。lncrna
為了解決外泌體實(shí)驗(yàn)遇到的上述的各種問(wèn)題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture?ExosomeIsolationKitPS)提取高純度細(xì)胞外囊泡,。外泌體膜含有分泌細(xì)胞源的蛋白和脂質(zhì),,眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細(xì)胞通過(guò)翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),,暴露在外泌體膜外側(cè)3)。另外,,T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4(Tim4通過(guò)巨噬細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過(guò)細(xì)胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4),。基于上述知識(shí),,我們利用Tim4固化磁珠,,在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,,再添加螯合劑洗脫外泌體,,這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開(kāi)發(fā),,并取得了成功。5)這是迄今為止取代黃金標(biāo)準(zhǔn)超速離心法的新型外泌體純化方法,。外泌體的靶向性外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類(lèi)型,、目標(biāo)組織的特點(diǎn)等進(jìn)行針對(duì)性的調(diào)整,。
除了siRNA和miRNA,mRNA也可以作為“貨物”被外泌體運(yùn)輸,。研究表明,在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分離出來(lái)的外泌體含有中流細(xì)胞特異性的mRNA,,而被愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒(EBV)感ran的細(xì)胞分泌的外泌體中也含有EBV的潛伏期mRNA,。因而,外泌體的這種運(yùn)載mRNA的能力引起了中流研究者們的注意,。近期,Saydam等率先報(bào)道了利用多泡體(含外泌體)負(fù)載mRNA/蛋白進(jìn)行中流zhiliao的研究,。研究者們利用脂質(zhì)體2000或病毒載體對(duì)HEK-293細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,,使其分泌的多泡體含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP,其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPRT:尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶;EGFP:增強(qiáng)型綠色熒光蛋白),。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處,,并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC),,神經(jīng)鞘瘤的增長(zhǎng)被明顯抑制。
外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結(jié)構(gòu),其穩(wěn)定性較好,可保護(hù)內(nèi)部生物分子免受體液中各種酶的影響,從而保持其完整性和生物活性,。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液,。目前,常用的儲(chǔ)存方法為冷凍保存,但是冷凍保存可能會(huì)導(dǎo)致外泌體形狀與物理性質(zhì)的改變,也可能導(dǎo)致多層囊泡的形成和聚集,反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致外泌體表面分子的生物特性、含量和標(biāo)志物組成發(fā)生變化,。血清中包含外泌體在內(nèi)的細(xì)胞外囊泡DNA在不同儲(chǔ)存環(huán)境可保持穩(wěn)定,血漿存放于4°C時(shí)其RNA會(huì)明顯降解,在–20°C下長(zhǎng)期保存也會(huì)導(dǎo)致血漿中外泌體總RNA降解,但miRNA卻十分穩(wěn)定,這也提示了外泌體miRNA作為生物標(biāo)志物的潛力。外泌體被工程化改造后,,具有靶向特定細(xì)胞類(lèi)型或組織的功能,。
科學(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機(jī)制功能。例如,,類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體,,高濃度集聚誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的TNF-α,可使類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化,。通過(guò)上述介紹可以知道癥狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有與癥狀進(jìn)展相關(guān)的分子,,神經(jīng)細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子,因此,,通過(guò)壓制或去除這些外泌體,,有希望壓制疾病發(fā)生,。隨著今后的研究發(fā)展,外泌體功能逐步清晰,,并擴(kuò)大臨床應(yīng)用,,有望將外泌體應(yīng)用在各種疾病醫(yī)治上,。甚至可嘗試?yán)猛饷隗w將siRNA和抗藥劑等運(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)細(xì)胞中,。外泌體被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子,,具有重要的臨床診斷和治理意義,。鼻腔灌洗液外泌體粒徑檢測(cè)
外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達(dá)基底層起效,。lncrna
外泌體的組成較為復(fù)雜,,其內(nèi)含有多種生物大分子,如:核酸(雙鏈DNA和各種RNA亞型),、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。這些分子被外泌體攜帶進(jìn)入血液循環(huán),,而后被靶細(xì)胞吸收,,從而調(diào)節(jié)靶細(xì)胞基因表達(dá)和細(xì)胞功能。此外,,外泌體相關(guān)的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子,,調(diào)節(jié)致病基因或抑病基因的表達(dá),,參與細(xì)胞分化,、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo),。有研究表明,,外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成,、增強(qiáng)種瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力、介導(dǎo)種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進(jìn)而促進(jìn)種瘤的發(fā)展,。lncrna