Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌小囊泡,，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu),；參與細(xì)胞之間的交流，物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持,，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān),。對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或示蹤,，有助于對外泌體的功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究,。目前對于外泌體的標(biāo)記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等,。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天,。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期,，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究,。外泌體被包裹在堅(jiān)硬的雙層膜中,，雙層膜保護(hù)外泌體的內(nèi)容物,，使外泌體能夠在組織中長距離移動,。外泌體的沉淀

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進(jìn)入受體細(xì)胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì),、促進(jìn)病毒感ran等功能,。據(jù)估計(jì)，單個外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸,。不同細(xì)胞來源的外泌體中既包含與細(xì)胞形成,、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的共有成分，也包含與來源細(xì)胞的生物功能相關(guān)的特異分子,。如B淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復(fù)合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ,，血小板和T細(xì)胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì),，而ai細(xì)胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導(dǎo)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、參與生理病理過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用,。外泌體原液外泌體研究相對困難，需要盡快開發(fā)操作簡單,、可提取高純度外泌體的技術(shù)。

通過對28例前列腺ai癥患者和19例正常人尿液外泌體中的miRNA進(jìn)行深度測序分析,，發(fā)現(xiàn)兩種miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者組明顯下調(diào)，表明尿液外泌體中的特異性miRNA可能作為前列腺ai的新型生物標(biāo)志物,。Khurana等［100］將研究對象由miRNAs擴(kuò)大至多種類型RNA，通過對慢性腎病患者尿液外泌體中各類RNA進(jìn)行系統(tǒng)研究,，在慢性腎病患者組中識別出30種明顯差異的lncRNAs,，表明尿液外泌體中的lncRNAs具有作為慢性腎病早期診斷標(biāo)志物的潛力。Skotland等的研究則表明尿液外泌體中的脂質(zhì)能夠作為前列腺ai的新型標(biāo)志物,，3種脂質(zhì)標(biāo)志物結(jié)合使用能夠有效提高對前列腺ai的診斷靈敏度(93%)和特異性(100%)。

膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來越來越受關(guān)注的問題,。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復(fù)雜的信息有助于這種興趣的興起。但是,，也已經(jīng)清楚，不同類型的分泌囊泡共存,，具有不同的細(xì)胞內(nèi)起源和形成模式,，因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型,。它們在真核細(xì)胞內(nèi)的多泡小體中形成，并且當(dāng)這些多泡小體與質(zhì)膜融合時分泌到細(xì)胞外,。有趣的是，不同的分子家族已被證明參與細(xì)胞內(nèi)形成外泌體及其隨后的分泌,，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型,。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能,。

結(jié)果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA,。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測,、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,，也通過運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明,，這項(xiàng)技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評價，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn),。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體,，給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年,，隨著國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦,，提案MISEV指南作為國際標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請務(wù)必閱讀這些方針,。外泌體可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化等方方面面。外周血外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

從外泌體中篩選的生物標(biāo)志物,，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理,。外泌體的沉淀

外泌體的提取方法：免疫磁珠法,，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn),。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不寬泛。外泌體的沉淀