Knepper等通過對透射電鏡得到的200個囊泡進行粒徑分析,結(jié)果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35~40nm,,磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5~1/10,。透射電鏡結(jié)合免疫金標記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息,有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機制與來源,。動態(tài)光散射(dynamiclightscattering,,DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis,NTA)都是利用光學(xué)手段獲得囊泡粒徑分布的方法,。兩者的不同之處在于動態(tài)光散射通過檢測散射光的強度計算得到顆粒粒徑,,而納米顆粒跟蹤分析通過追蹤單個粒子的運動軌跡計算得到樣品濃度、粒徑分布等信息,。在過去幾年中,,有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌,并討論了其潛在的生物學(xué)功能,。植物外泌體提取試劑盒
人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,,包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞,、血小板,、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,,外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,,進而喚醒靶細胞細胞內(nèi)的信號通路,。二是在細胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,,從而喚醒細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA,。外泌體圖片外泌體能負載的治理物質(zhì)包括小分子化合物,、蛋白質(zhì)、寡核苷酸等,,且在體液中寬泛分布且具有定向歸巢能力,。
為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture?ExosomeIsolationKitPS)提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質(zhì),,眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細胞膜內(nèi)側(cè),,暴露在外泌體膜外側(cè)3)。另外,,T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4(Tim4通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4),。基于上述知識,,我們利用Tim4固化磁珠,,在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,再添加螯合劑洗脫外泌體,,這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開發(fā),,并取得了成功。5)這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法,。
在20世紀80年代,,外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細胞分泌的內(nèi)體來源的囊泡。人們對這些細胞外囊泡的興趣逐漸增加,,因為它們似乎參與了很多細胞過程,。外泌體攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNAs,,介導(dǎo)體內(nèi)不同細胞類型之間的細胞間通訊,,從而影響正常和病理狀態(tài)。只有近,,科學(xué)家才認識到將外泌體與其他類型的細胞外囊泡分開的困難,這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復(fù)雜但正在發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域,,該綜述著重于外泌體和其他分泌的細胞外囊泡的定義,。討論了它們的生物發(fā)生,分泌及其后續(xù)的命運,,因為它們的功能依賴于這些重要過程,。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。
外泌體調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細胞的機能,,延長毛發(fā)根部的囊生長期,,同時活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊,使其提前進入新的生長周期,,實現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長,。骨衰老小鼠注射外泌體試驗證明:年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機。來源于脂肪組織中的干細胞分泌一些信號分子和生長因子,,可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長周期的毛發(fā)根部的囊干細胞進行分化,,向上遷移生成表皮細胞和皮脂腺,向下遷移生成毛母細胞,。毛發(fā)根部的囊的生長周期決定毛發(fā)的生長周期,,而毛發(fā)根部的囊干細胞的機能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度,外泌體靶向調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細胞的功能,。外泌體是一種由活細胞分泌的,,直徑約為40~160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。廣州腹膜透析液外泌體
泌體是細胞內(nèi)源性的小囊泡,,由大多數(shù)細胞分泌,。植物外泌體提取試劑盒
除了siRNA和miRNA,mRNA也可以作為“貨物”被外泌體運輸,。研究表明,,在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分離出來的外泌體含有中流細胞特異性的mRNA,而被愛潑斯坦-巴爾病毒(EBV)感ran的細胞分泌的外泌體中也含有EBV的潛伏期mRNA,。因而,,外泌體的這種運載mRNA的能力引起了中流研究者們的注意。近期,,Saydam等率先報道了利用多泡體(含外泌體)負載mRNA/蛋白進行中流zhiliao的研究,。研究者們利用脂質(zhì)體2000或病毒載體對HEK-293細胞進行轉(zhuǎn)染,使其分泌的多泡體含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP,,其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPRT:尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶;EGFP:增強型綠色熒光蛋白),。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處,并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC),,神經(jīng)鞘瘤的增長被明顯抑制,。植物外泌體提取試劑盒