保存和運輸免疫組化樣本的關(guān)鍵點:1,、快速固定(<20分鐘)于適量(樣本體積20倍)固定液中。2,、使用適宜固定劑(如10%中性福爾馬林),,掌握合適固定時間(6-24小時)。3,、固定后室溫穩(wěn)定至少兩天,,冰凍樣本-80℃保存,運輸時用干冰或冰袋維持低溫,。4,、完整標(biāo)注樣本信息,確保記錄無誤,。5,、選平底容器防損。6,、定期更換固定液,。7、運輸時密封防污染損壞,。8、石蠟包埋前完成脫水,、透明步驟,。9、建議備份樣本,。10,、遵守相關(guān)法規(guī)和生物安全標(biāo)準(zhǔn)。合理措施確保樣本質(zhì)量與實驗準(zhǔn)確性,。免疫組化的結(jié)果判讀需要注意那些細(xì)節(jié),?揚州病理切片免疫組化分析
免疫組化即用型二步法的具體實驗流程步驟簡介:1、脫蠟,、水化組織切片,;2、根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求,,對組織切片進(jìn)行預(yù)處理,;3、0.3%或3%H2O2去離子水孵育5分鐘-30分鐘,,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,,PBS或TBS沖洗,;4、滴加一抗,,室溫或37℃孵育30~60分鐘,,或4℃過夜,PBS或TBS浸洗3分鐘×5次,;5,、滴加enhangcer增強(qiáng)劑,37℃30min,,PBS或TBS浸洗3分鐘×5次,;6、滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體,,室溫/37℃孵育30分鐘-1h,,PBS/TBS沖洗,3分鐘×5次,;7,、應(yīng)用DAB溶液顯色;8,、蒸餾水沖洗,、復(fù)染、脫水,、透明,、封片。揚州免疫組化實驗流程優(yōu)化的抗原修復(fù)步驟能明顯提升免疫組化染色的敏感性和特異性,。
免疫組化技術(shù)在基因表達(dá)調(diào)控研究中扮演著至關(guān)重要的角色,,在基因表達(dá)調(diào)控研究中,免疫組化技術(shù)的主要作用體現(xiàn)在以下幾個方面:1,、定位分析:通過特定的抗體,,免疫組化技術(shù)可以精確地定位到細(xì)胞或組織中特定蛋白質(zhì)的分布情況,從而了解相關(guān)基因的表達(dá)位置和表達(dá)水平,。2,、表達(dá)模式研究:通過比較不同條件下(如正常與病變組織、不同發(fā)育階段等)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況,,免疫組化技術(shù)可以幫助研究者揭示基因表達(dá)的變化規(guī)律,,進(jìn)而理解基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。3,、功能研究:通過免疫組化技術(shù)檢測特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和定位,,研究者可以推斷這些蛋白質(zhì)在細(xì)胞或組織中的功能,進(jìn)而推測相關(guān)基因的功能,。4,、與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合:免疫組化技術(shù)可以與其他分子生物學(xué)技術(shù)(如PCR,、基因芯片等)相結(jié)合,從多個角度研究基因表達(dá)調(diào)控,,提供更準(zhǔn)確,、深入的信息。
一份免疫組化的報告,,里面會有很多的加號(+),,和減號(-)。那么這些加號和減號是什么意思呢?加號越多是說我們的疾病嚴(yán)重程度越高嗎?不用擔(dān)心,,并不是這樣的,。免疫組化中的(+),也就是指陽性,,指切片中的某些細(xì)胞表達(dá)特定的免疫標(biāo)記,,而(-)即陰性,指這些細(xì)胞不表達(dá)這些免疫標(biāo)記,。這些免疫標(biāo)記的陽性與陰性表示了細(xì)胞的來源,,也就是說我們是通過這些不同標(biāo)記的陽性陰性來認(rèn)識這些細(xì)胞,從而給這些細(xì)胞貼上"名片”的,。所以這些(+)(-)與疾病的嚴(yán)重程度或者惡性程度沒有關(guān)系,。免疫組化對Ca分期有重要作用。
免疫組化鏡檢:在進(jìn)行鏡檢前可以通過相關(guān)的資料進(jìn)行查詢,,進(jìn)行指導(dǎo)檢查到抗體的表達(dá)部位有細(xì)胞間質(zhì),、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿,、核膜,、細(xì)胞核以及在其中的多個部位表達(dá)(如:MPO抗體表達(dá)在細(xì)胞膜、細(xì)胞漿,、核膜、細(xì)胞核上)和表達(dá)組織(如:VWF抗體在血管壁上表達(dá),,呈現(xiàn)環(huán)形),。實際操作過程中,在顯微鏡下觀察時,,先在4倍鏡下查找組織及其范圍,,然后查看整個組織確定陽性產(chǎn)物的表達(dá)部位,然后將陽性產(chǎn)物表達(dá)部位置于視野正中,,換高倍鏡觀察,。免疫組化能分辨組織中各類細(xì)胞標(biāo)志物。江蘇免疫組化
免疫組化對評估診斷效果有一定意義,。揚州病理切片免疫組化分析
免疫組化技術(shù),,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理—抗原抗體反應(yīng),,即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素,、酶,、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),,對其進(jìn)行定位,、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry),,是研究蛋白質(zhì)在組織細(xì)胞中分布,、功能狀態(tài)及動態(tài)變化的強(qiáng)有力工具。免疫組化技術(shù)具有高靈敏度,、高選擇性和無放射性污染的特點,,其結(jié)果容易數(shù)字化和圖像處理,是一種實用性和準(zhǔn)確性高的分子生物學(xué)技術(shù),。在臨床醫(yī)學(xué)研究中,,免疫組化被廣泛應(yīng)用于Ca組織結(jié)構(gòu)及特異性結(jié)構(gòu)物的鑒定,幫助醫(yī)生確定病變的類型,、分級和分期,進(jìn)一步指導(dǎo)臨床醫(yī)療和預(yù)后判斷,。揚州病理切片免疫組化分析