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在生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,,卵母細(xì)胞冷凍保存技術(shù)作為輔助生殖技術(shù)的重要組成部分,,近年來取得了進(jìn)展,。尤其是針對(duì)成熟卵母細(xì)胞紡錘體的冷凍保存研究,不僅關(guān)乎女性生育能力的保存,,還涉及到遺傳學(xué)的穩(wěn)定性和安全性,。成熟卵母細(xì)胞,即處于第二次減數(shù)分裂中期(MII期)的卵母細(xì)胞,,其內(nèi)部包含一個(gè)高度復(fù)雜且精細(xì)的紡錘體結(jié)構(gòu),。紡錘體由微管組成,這些微管通過動(dòng)態(tài)變化,,將染色體緊密地聯(lián)系在一起,,并確保在細(xì)胞分裂過程中染色體的正確分離。成熟卵母細(xì)胞的紡錘體對(duì)溫度變化和機(jī)械刺激極為敏感,,這使得其冷凍保存過程充滿了挑戰(zhàn),。紡錘體在減數(shù)分裂中也發(fā)揮重要作用,確保生殖細(xì)胞染色體正確分離,。上海偏光成像紡錘體
如何觀察紡錘體呢,?在普通光學(xué)顯微鏡下,人類卵母細(xì)胞是半透明的,,無法對(duì)紡錘體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和分析,。傳統(tǒng)方法是用一種特異的DNA熒光染料對(duì)卵母細(xì)胞染色,在紫外光下可顯示紡錘體,,這種免疫熒光方法對(duì)卵母細(xì)胞有損傷,,不能應(yīng)用于臨床。為了更好的觀測(cè)紡錘體,,美國(guó)海洋生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的R.Oldenbourg等利用紡錘體的雙折射特性,,開發(fā)出偏振光顯微鏡。現(xiàn)今,,偏振光顯微鏡已經(jīng)發(fā)展成為一種無創(chuàng)性的觀察和分析紡錘體動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)的顯微觀測(cè)系統(tǒng),,我們也叫它紡錘體觀測(cè)儀。它不僅能對(duì)雙折射性紡錘體信號(hào)的有無進(jìn)行定性分析,,還能對(duì)信號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)行定量分析。上海偏光成像紡錘體揭示卵母細(xì)胞關(guān)鍵結(jié)構(gòu)紡錘體的形態(tài)在細(xì)胞分裂的不同階段會(huì)有所變化,。
阿爾茨海默病患者中,,微管蛋白(如tau蛋白)的突變和異常磷酸化會(huì)影響微管的穩(wěn)定性和紡錘體的組裝,,導(dǎo)致染色體分離異常和細(xì)胞周期紊亂。紡錘體功能障礙會(huì)導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定,,增加基因組的不穩(wěn)定性,,進(jìn)而影響神經(jīng)元的正常功能和存活。正常情況下,,成熟的神經(jīng)元處于G0期,,不會(huì)重新進(jìn)入細(xì)胞周期。然而,,阿爾茨海默病患者中,,神經(jīng)元可能會(huì)重新進(jìn)入細(xì)胞周期,但由于紡錘體功能障礙,,無法完成正常的細(xì)胞分裂,,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。在神經(jīng)元中,,紡錘體的正常功能對(duì)于神經(jīng)元的發(fā)育,、分化和維持至關(guān)重要。
通過抑制細(xì)胞周期重新進(jìn)入,,可以減少神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡,,保護(hù)神經(jīng)元的存活。例如,,使用細(xì)胞周期抑制劑(如CDK抑制劑)可以抑制細(xì)胞周期重新進(jìn)入,,減少神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡。此外,,通過促進(jìn)神經(jīng)元的細(xì)胞周期退出,,也可以減少神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡。通過改善線粒體功能,,可以恢復(fù)能量代謝,,保護(hù)神經(jīng)元的存活。例如,,使用線粒體功能增強(qiáng)劑(如輔酶Q10)可以改善線粒體功能,,恢復(fù)能量代謝。此外,,通過減少線粒體的氧化應(yīng)激,,也可以改善線粒體功能。紡錘體微管的動(dòng)態(tài)變化是細(xì)胞分裂周期的重要標(biāo)志,。
液晶偏振光顯微鏡是一種將液晶可變減速器,、電子成像及數(shù)碼成像技術(shù)結(jié)合起來的成像系統(tǒng),能夠觀測(cè)到具有雙折性特征的細(xì)胞結(jié)構(gòu),如紡錘體和透明帶,。Polscope成像系統(tǒng)無需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定和染色,,因此能夠評(píng)估卵母細(xì)胞的質(zhì)量與紡錘體、透明帶等的相關(guān)性,。在紡錘體卵冷凍研究中,,Polscope成像系統(tǒng)可用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化,評(píng)估冷凍保護(hù)劑的效果和冷凍速率對(duì)紡錘體的影響,。此外,,解凍后也可利用Polscope成像系統(tǒng)評(píng)估紡錘體的恢復(fù)情況和穩(wěn)定性,從而篩選出高質(zhì)量的卵母細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)操作,。紡錘體的功能異常與某些藥物的副作用有關(guān),,如化療藥物可能干擾紡錘體的形成和功能。上海無需染色紡錘體廠家
紡錘體在細(xì)胞分裂后期推動(dòng)染色體向細(xì)胞兩極移動(dòng),。上海偏光成像紡錘體
紡錘體觀測(cè)儀使ICSI更加安全可靠在進(jìn)行單精子卵胞漿內(nèi)注射(ICSI)授精時(shí),,**初人們觀察人體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞時(shí),通常認(rèn)為,,卵母細(xì)胞紡錘**于***極體附近,,故傳統(tǒng)的ICSI操作是轉(zhuǎn)動(dòng)卵母細(xì)胞使其***極**于6點(diǎn)或12點(diǎn)處,然后在3點(diǎn)處注入精子,。但是,,在大量使用紡錘體觀測(cè)儀后發(fā)現(xiàn),***極體并不能很好地預(yù)測(cè)紡錘體的位置,。一項(xiàng)研究提示,,在ICSI后,用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體與***極體的夾角,,結(jié)果發(fā)現(xiàn)小于30°這組卵母細(xì)胞的正常受精率更高,。極體在卵周隙中的移動(dòng),或者紡錘體在胞質(zhì)中的易位都使兩者的位置關(guān)系發(fā)生改變,,普通光學(xué)顯微鏡下ICSI穿刺部位的選擇,,可能會(huì)損傷紡錘體和(或)造成染色體的異常。通過紡錘體觀測(cè)儀,,可以精確地對(duì)卵母細(xì)胞中紡錘體的位置進(jìn)行定位,,從而避免在ICSI過程中損傷紡錘體,使ICSI更加安全可靠,。有文獻(xiàn)報(bào)道,,在進(jìn)行ICSI時(shí),觀察到“雙折射紡錘體”的成熟卵母細(xì)胞的受精率和質(zhì)量胚胎率***高于未觀察到雙折射紡錘體組,。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn),,有些卵母細(xì)胞在普通光學(xué)顯微鏡下看到是正常的,,但在紡錘體觀測(cè)儀這個(gè)“照妖鏡”下,就能顯出原形,,表現(xiàn)為有***極體,、但缺乏雙折射的紡錘體,這類卵母細(xì)胞ICSI后的受精率和妊娠率極低,。上海偏光成像紡錘體