二、生化及免疫學(xué)檢驗(yàn)：5、精漿肉堿測定【正常參考值】濃度為239.56±l05.59umol/L,。【臨床意義】精漿肉堿測定精漿中的肉堿主要由附睪分泌,，其次是精囊,。精漿中肉堿分為游離肉堿和乙酰肉堿二種，附睪中含高濃度的肉堿,，主要與精子在附睪成熟時(shí)所需的能量來源有關(guān)?，F(xiàn)認(rèn)為精漿肉堿含量和果糖含量的變化，常反映附睪,、精囊的功能,。精漿肉堿及果糖含量正常，表明附睪,、精囊功能正常,。當(dāng)肉堿含量高于正常的50%，而果糖含量降低,，則提示精囊功能障礙,，附睪功能正常；精漿肉堿約為正常含量的50%左右,，果糖含量正常,，說明附睪功能障礙，精囊功能正常,；而肉堿急劇下降,，果糖含量亦減少，表示精囊,、附睪功能均發(fā)生障礙,。6、抗精子抗體(AsAb)測定【正常參考值】陰性,?！九R床意義】AsAb檢測對不育原因檢查有重要臨床意義。存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb,，可抑制精子的活動(dòng),，干擾精子的運(yùn)行，阻礙精子穿透及精卵結(jié)合，使受精發(fā)生障礙,。即使已經(jīng)受精,，也可能影響發(fā)育中的胚胎，造成免疫性流產(chǎn),。不育夫婦AsAb陽性者占25%-30%,，當(dāng)精子輸出管道受阻、睪丸損傷,、炎癥,、附睪等生殖系***時(shí)，系精子外逸而產(chǎn)生的自身抗體,。在精子研發(fā)的歷程中,，計(jì)算機(jī)輔助精子檢測經(jīng)歷了黑白圖像機(jī)、彩色圖像檢測,。目前先進(jìn)的是熒光精子圖像檢測,。馬精子分析W.H.O 5

精子分析儀工作原理以灰度識(shí)別CASA為例，采用高分辨率的攝影技術(shù)與顯微鏡結(jié)合,，**標(biāo)本液化后吸入計(jì)數(shù),，通過顯微鏡放大后，用圖像采集系統(tǒng)獲取精子動(dòng),、靜態(tài)圖像后輸入計(jì)算機(jī),。根據(jù)設(shè)定的精子大小和灰度、精子運(yùn)動(dòng)移位及運(yùn)動(dòng)參數(shù),，對采集圖像進(jìn)行精子密度,、活動(dòng)力、活動(dòng)率,、運(yùn)動(dòng)特征等幾十項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目動(dòng)態(tài)分析,，由計(jì)算機(jī)處理后，打印出“**分析檢查報(bào)告以及精子動(dòng)態(tài)特征分布圖”,。一次能對1000個(gè)精子進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測分析,，2-3分鐘即可完成檢測[1]。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便,，用量少,，檢測速度快，重復(fù)性優(yōu)于人工檢測,，并且能夠快速,、準(zhǔn)確的測定精子密度、活力,、精子分級(jí)等,，還可提供精子運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的多種參數(shù)等,。缺點(diǎn)：影響分析結(jié)果的因素較多，除**本身性質(zhì)所含的固有誤差外,，不同的精子計(jì)數(shù)池的相對準(zhǔn)確性和精確性可產(chǎn)生明顯不一致的效果,。密度精子分析BCFHamilton Thorne精子分析儀具有高度的可靠性和穩(wěn)定性，能夠長時(shí)間穩(wěn)定運(yùn)行,，保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,。

世界衛(wèi)生組織(WHO)《人類精液及精子—宮頸粘液相互作用實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊》于1980年***出版，以滿足臨床與科研對人類精液標(biāo)準(zhǔn)化檢測程序日益增長的需求,。該手冊是人類精液實(shí)驗(yàn)室檢查和處理程序及方法的標(biāo)準(zhǔn)操作指南,，旨在提高精液分析的質(zhì)量和提高不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的可比性。在過去40年里,，該手冊進(jìn)行了4次修訂與補(bǔ)充(1987年,、1992年、1999年和2010年),，內(nèi)容涉及精液檢查的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序、精子功能,、精漿生化,、精液處理與冷凍以及質(zhì)量保證等，已成為國際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn),，被世界各地臨床和實(shí)驗(yàn)室***使用,。中國衛(wèi)生部已在2003年將其納入人類輔助生殖技術(shù)規(guī)范。WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(第5版)》精液參考值的數(shù)據(jù)是來自全球3大洲8個(gè)國家的前瞻性,、多中心臨床研究的結(jié)果,，通過循證醫(yī)學(xué)研究獲得的精液參數(shù)參考值具有里程碑式意義。自2010年出版以來成為WHO很受歡迎的出版物之一,，即使在**近幾年其下載量也在穩(wěn)步增長,。它是男科實(shí)驗(yàn)室及全球范圍內(nèi)開展精液分析操作的其他實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院和研究機(jī)構(gòu)使用的標(biāo)準(zhǔn)操作手冊,。該手冊在國際大會(huì),、科學(xué)會(huì)議、以及WHO合作中心,、專業(yè)學(xué)會(huì)和其他學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)的培訓(xùn)項(xiàng)目中進(jìn)行了***傳播,。截止到2021年，已被3000余篇同行評(píng)議論文和評(píng)論引用,。

采集精液前5～7天內(nèi)必須停止性生活,，并且不得有**、夢遺等情況,，還應(yīng)禁煙戒酒,，忌服對生精功能有影響的藥物等,。采取精液時(shí)間以晨起為佳，采精前用溫水將雙手,、**,，尤其是**洗凈?？刹捎?*法或電動(dòng)按摩**法引起排精,。精液的排出具有一定順序，開頭部分來自前列腺,、附睪及壺腹,，伴有大量精子，***部分來自精囊,，故應(yīng)收集整份精液,，不要遺漏任何部分，尤其是開頭部分,。正因?yàn)橐讈G失精液的***部分,故不能用體外**法收集精液,。盛精液的容器應(yīng)干凈、無菌,、干燥,，采精前容器的溫度應(yīng)與室溫相同；瓶子不應(yīng)過大,，但瓶口不應(yīng)過小,，以免將精液射出瓶外；還應(yīng)貼上標(biāo)簽,，記錄姓名及取精時(shí)間,。在冷天應(yīng)將精液標(biāo)本保溫，放置在貼身內(nèi)衣袋中,，不可傾斜或倒置,，盡可能在1小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。選擇合適的CASA檢測原理和設(shè)備,，確保幀率要求,，避免因設(shè)備問題影響檢測結(jié)果?。

精液顯微鏡檢查(1)精子存活率：排精后30～60分鐘,，正常精子存活率應(yīng)為80%～90%,，精子存活率降低是導(dǎo)致不育的重要原因。(2)精子活動(dòng)力：指精子活動(dòng)狀態(tài),，也是指活動(dòng)精子的質(zhì)量,。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦將精子活動(dòng)力分為4級(jí)：①精子活動(dòng)好，運(yùn)動(dòng)迅速,，活潑有力,，直線向前運(yùn)動(dòng),；②精子活動(dòng)較好，運(yùn)動(dòng)速度尚可,，游動(dòng)方向不定,，呈直線或非直線運(yùn)動(dòng)，帶有回旋,；③精子運(yùn)動(dòng)不良,，運(yùn)動(dòng)遲緩，原地打轉(zhuǎn)或抖動(dòng),，向前運(yùn)動(dòng)能力差,；④死精子，精子完全不活動(dòng),。正常精子活動(dòng)力應(yīng)在③級(jí)以上,，若＞40%的精子活動(dòng)不良(③、④)級(jí),，常是導(dǎo)致男性不育的重要原因,。精子活動(dòng)力低，主要見于精索靜脈曲張,、泌尿生殖系統(tǒng)非特異性***,，應(yīng)用某些藥物如抗瘧藥、雄***等所致,。CASA系統(tǒng)主要用于精子動(dòng)力學(xué)的分析，可以評(píng)估精子的濃度,、活力等參數(shù),。廣州前向運(yùn)動(dòng)精子分析重復(fù)性高

精子分析儀參數(shù)，精子頭側(cè)擺幅度（ALH）?：精子頭關(guān)于其平均路徑的側(cè)向位移幅度,。馬精子分析W.H.O 5

精子分析儀使用方法儀器的使用方法因型號(hào),、廠家差異不盡相同，操作人員上崗前必須經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn),，了解工作原理,、操作規(guī)程、校正方法等,，使用前必須仔細(xì)閱讀說明書,。一般儀器都會(huì)經(jīng)歷如下操作步驟[1]：開機(jī)接通電源，打開計(jì)算機(jī)輔助**分析系統(tǒng),。1.輸入患者信息及**理學(xué)檢查結(jié)果,。2.加樣取液化的**1滴，滴入精子計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中,，置顯微鏡操作平臺(tái)上,，點(diǎn)擊“活動(dòng)顯示”菜單,，調(diào)節(jié)好顯微鏡焦距，顯示器上即可顯示待測標(biāo)本的精子運(yùn)動(dòng)圖像,。3.分析點(diǎn)擊“計(jì)算分析”菜單,，系統(tǒng)進(jìn)入自動(dòng)分析狀態(tài)，圖像顯示區(qū)出現(xiàn)精子分割圖像并進(jìn)行分析,。4.打印報(bào)告分析結(jié)束后,，可根據(jù)需要打印出分析結(jié)果。馬精子分析W.H.O 5