Dulbecco’s改良培養(yǎng)基–DMEM（Dulbecco’sModifiedEagleMedium）是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的,，與MEM培養(yǎng)基相比,，氨基酸的含量增加了2倍，維生素的含量增加了4倍,，同時(shí)還增加了非必須氨基酸,、微量鐵離子以及**酸鈉,。DMEM培養(yǎng)基**初設(shè)計(jì)葡萄糖含量為1000mg/L（低糖型），后來(lái)又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L（高糖型）,，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng),。針對(duì)***的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用，我們提供多種組分的DMEM改良培養(yǎng)基,。高糖型培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長(zhǎng)快,、粘附性低的細(xì)胞、雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞,、克隆細(xì)胞,、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞、各種原代病毒宿主細(xì)胞,、單一細(xì)胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn),，例如利用CHO細(xì)胞表達(dá)EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢,、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),。不含葡萄糖的培養(yǎng)基可以根據(jù)研究需要，隨意調(diào)節(jié)葡萄糖的濃度,，方便快捷,。L-谷氨酰胺（Glutamine）是細(xì)胞培養(yǎng)中所必需的一種營(yíng)養(yǎng)元素，但其在溶液中不穩(wěn)定,，會(huì)自發(fā)降解,，不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基，可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量，在使用時(shí)添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細(xì)胞的生長(zhǎng),。 RPMI-1640是改進(jìn)型的McCoy ‘s 5A培養(yǎng)基,，使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)。醫(yī)用細(xì)胞培養(yǎng)基

DMEM 培養(yǎng)基成分復(fù)雜且精妙,，除了富含氨基酸,、維生素、葡萄糖,、等主要成分外,，還包含多種無(wú)機(jī)鹽。這些無(wú)機(jī)鹽在維持細(xì)胞內(nèi)外滲透壓平衡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用,，確保細(xì)胞不會(huì)因滲透壓異常而出現(xiàn)失水皺縮或吸水膨脹等情況,，維持細(xì)胞正常形態(tài)。同時(shí),，無(wú)機(jī)鹽中的離子,，如鈣離子、鎂離子等,，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程,，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和代謝等生理活動(dòng),，為細(xì)胞的生命活動(dòng)提供穩(wěn)定的離子環(huán)境,，與其他營(yíng)養(yǎng)成分協(xié)同作用，共同促進(jìn)細(xì)胞的健康生長(zhǎng),。貴州RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基源頭直供Ham’sF-10營(yíng)養(yǎng)混合物（Ham’sF-10Nutrient Mixture）是由Ham針對(duì)CHO細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)設(shè)計(jì)出的一種培養(yǎng)基,。

    培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素,細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg～320mOsm/kg,。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng),。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì),。向培養(yǎng)液中添加HEPES時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度,。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細(xì)胞所需pH在-。但是,，細(xì)胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類(lèi)不同而不同,。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH(-),而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2體系進(jìn)行緩沖,，因此,，氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5％,，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為,；如果CO2濃度維持在10％,，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊,，以保證氣體交換,。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH-范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,，但是非常昂貴,，在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（）共用,，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加,。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中,。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,，堿性培養(yǎng)液呈深紅色,。

    隨意調(diào)節(jié)葡萄糖的濃度，方便快捷,。高糖型培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長(zhǎng)快,、粘附性低的細(xì)胞、雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞,、克隆細(xì)胞、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞,、各種原代病毒宿主細(xì)胞,、單一細(xì)胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn)，例如利用CHO細(xì)胞表達(dá)EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗,。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢,、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。HEPES是一種優(yōu)良的生物緩沖劑,，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用,，添加HEPES的培養(yǎng)基能夠較長(zhǎng)時(shí)間保持恒定的PH范圍，可以有效的防止培養(yǎng)液PH波動(dòng)較大對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生不利的影響,?？捎糜跓o(wú)CO2培養(yǎng)箱。酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值的指示劑,，用以持續(xù)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)液的酸堿度,，在低PH值時(shí)酚紅使培養(yǎng)液呈黃色，而較高的PH值時(shí)使培養(yǎng)液呈紫色,，PH值～,，適合細(xì)胞培養(yǎng),。但酚紅也有一些缺點(diǎn)，使用不含酚紅的培養(yǎng)基,。酚紅會(huì)干擾流式細(xì)胞分析時(shí)候的檢測(cè),。此外，一些無(wú)血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會(huì)干擾鈉-鉀平衡,。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,，青霉素能夠干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌特別有效,；而鏈霉素能夠與細(xì)菌核糖體30S亞單位結(jié)合,，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌均有效,，但對(duì)革蘭氏陰性菌特別有效,。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預(yù)防絕大部分的細(xì)菌污染。高糖 DMEM 適合生長(zhǎng)快,、粘附低的細(xì)胞,，如腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng) 。

    動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（animalcellculture）就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,，將它分散成單個(gè)細(xì)胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后,，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖,。細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)有哪些,？按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細(xì)胞培養(yǎng)基,、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基,、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類(lèi),。DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的，各成分份量加倍,，分低糖（1000mg/L）,、高糖（4500mg/L）兩種類(lèi)型。細(xì)胞生長(zhǎng)快,。附著稍差的腫瘤細(xì)胞,、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好，常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng),。2.神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基可為神經(jīng)元生長(zhǎng)提供基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),。IPL-41昆蟲(chóng)培養(yǎng)基（IPL-41InsectMedium）旨在用于大規(guī)模擴(kuò)增草地貪夜蛾（Spodopterafrugiperda）細(xì)胞系，也常用于通過(guò)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（BEVS）進(jìn)行蛋白表達(dá),。IPL-41培養(yǎng)基是對(duì)原始IPL配方的改良,，由美國(guó)農(nóng)業(yè)部昆蟲(chóng)病理實(shí)驗(yàn)室Weiss等人開(kāi)發(fā),，用于大規(guī)模擴(kuò)增草地貪夜蛾衍生細(xì)胞系。Weiss向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入了胎牛血清和TPB培養(yǎng)基（TryptosePhosphateBroth）,，成功地實(shí)現(xiàn)了IPL-21AE,。MEM α 培養(yǎng)基不含核苷和脫氧核苷的MEM α培養(yǎng)基常常用作DG44和其他DHFR-缺陷型細(xì)胞的篩選培養(yǎng)基。北京醫(yī)用細(xì)胞培養(yǎng)基批發(fā)廠

DMEM培養(yǎng)基**初設(shè)計(jì)葡萄糖含量為1000mg/L（低糖型）,，后來(lái)又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L（高糖型）,。醫(yī)用細(xì)胞培養(yǎng)基

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細(xì)胞培養(yǎng)基,、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基,、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類(lèi),。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無(wú)機(jī)鹽,、葡萄糖組成,，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng),。其主要用于細(xì)胞的漂洗,、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）,。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+,、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+,、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外,，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng),；后者緩沖能力較強(qiáng),，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來(lái)自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類(lèi)培養(yǎng)基,，如血漿,、血清、雞胚浸出液等,。其優(yōu)點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)成分豐富,，培養(yǎng)效果良好,，但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來(lái)源受限且制作過(guò)程復(fù)雜,、批間差異大,。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液,、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類(lèi)物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少,。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。醫(yī)用細(xì)胞培養(yǎng)基

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