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什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,?蛋白質(zhì)的翻譯后修飾()是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾,。對(duì)于大部分的蛋白質(zhì)來說,這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟,。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分,。通過向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),,是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能,。這個(gè)過程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄,,并影響表觀遺傳學(xué)。蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,。湖北蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)定量分析:1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記,,組織/細(xì)胞破碎,提取,、提純目的蛋白質(zhì)(基于SILAC的乙?;揎椊M學(xué)定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 對(duì)多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學(xué)定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對(duì)乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?;亩芜M(jìn)行序列分析,。6. 數(shù)據(jù)分析,比對(duì)不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對(duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。湖北蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)鑒定蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一,。
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過程的重要方式,,幾乎在每個(gè)細(xì)胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義,。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測(cè)。因此,,要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,,然后再進(jìn)行后續(xù)分析,。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行,可以對(duì)翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究,。
蛋白質(zhì)乙?;揎椂x:蛋白質(zhì)在細(xì)胞中經(jīng)過翻譯后,到被運(yùn)輸?shù)较鄳?yīng)的細(xì)胞器并且發(fā)生特定的生物學(xué)作用前會(huì)經(jīng)過很重要的一步加工,,那就是蛋白質(zhì)翻譯后修飾加工,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性、定位或功能,。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進(jìn)一步增加了細(xì)胞通路機(jī)制和生命活動(dòng)的多樣性和復(fù)雜性,。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化,乙?;?,糖基化,,泛素化等。蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙酰化基團(tuán),。在細(xì)胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上,。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾,,直到后來研究發(fā)現(xiàn)原核細(xì)胞中年也存在著蛋白質(zhì)乙酰化修飾,。所以,,乙酰化修飾是原核和真核生物所共有的一種翻譯后修飾類型,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)磷酸化修飾具有靈活的特性,。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡(jiǎn)單,、靈活,、可逆的特性,以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性,,使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種普遍的調(diào)控手段,。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖,、發(fā)育,、分化、細(xì)胞骨架調(diào)控,、細(xì)胞凋亡,、神經(jīng)活動(dòng)、肌肉收縮,、新陳代謝發(fā)生等生命活動(dòng)的過程,,并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果,。在早期的研究中,,乙酰化修飾一直被認(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾,。湖北蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)鑒定
在眾多乙?;揎椀牡鞍踪|(zhì)中,研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了,。湖北蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾,?作用機(jī)制和生物學(xué)功能是什么?前體蛋白是沒有活性的,,常常要進(jìn)行一個(gè)系列的翻譯后加工,,才能成為具有功能的成熟蛋白。加工的類型是多種多樣的,,一般分為以下幾種:N-端fMet或Met的切除,、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和剪切,。當(dāng)合成蛋白質(zhì)時(shí),,20種不同的氨基酸會(huì)組合成為蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的翻譯后蛋白質(zhì)其他的生物化學(xué)官能團(tuán)(如醋酸鹽,、磷酸鹽,、不同的脂類及碳水化合物)會(huì)附在蛋白質(zhì)上從而改變蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì),或是造成結(jié)構(gòu)的改變(如建立雙硫鍵),,來擴(kuò)闊蛋白質(zhì)的功能,。再者,酶可以從蛋白質(zhì)的N末端移除氨基酸,,或從中間將肽鏈剪開,。舉例來說,胰島素它會(huì)在建立雙硫鍵后被剪開兩次,,并在鏈的中間移走多肽前體,,而形成的蛋白質(zhì)包含了兩條以雙硫鍵連接的多肽鏈。湖北蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)鑒定
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