什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾？蛋白質(zhì)的翻譯后修飾（）是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾,。對(duì)于大部分的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分,。通過向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來(lái)改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)，是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟,。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能,。這個(gè)過程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄，并影響表觀遺傳學(xué)。乙?；揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型,。南京琥珀酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的類型：翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除,、二硫鍵的形成,、化學(xué)修飾和肽鍵的裂解，其中磷酸化是比較常見的,。蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾反應(yīng)是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎(chǔ)上,，通過基于其氨基酸殘基的化學(xué)反應(yīng)獲得新的生物結(jié)合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生,？翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端?，F(xiàn)有的官能團(tuán)或新官能團(tuán)的引入可被用于修飾蛋白質(zhì)，以擴(kuò)展20個(gè)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的化學(xué)組成,。翻譯后修飾的位點(diǎn)通常帶有可以在化學(xué)反應(yīng)中充當(dāng)親核試劑的官能團(tuán),，如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基,；賴氨酸,、精氨酸和組氨酸胺形式；同時(shí),，在蛋白質(zhì)的N端和C端,，天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點(diǎn)。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點(diǎn)的一些亞甲基上,。上海蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)質(zhì)譜鑒定在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,，蛋白會(huì)首先被酶切成肽段，然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析,。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)：血漿蛋白糖基化修飾分析：蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,，是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細(xì)胞外蛋白常被糖基化,，糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白,。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機(jī)體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機(jī)體分泌、滲漏,、脫落的蛋白質(zhì),，其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象,、生物活性,、運(yùn)輸和定位，而且在分子識(shí)別,、細(xì)胞通信,、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,。因此對(duì)血漿蛋白糖基化進(jìn)行分析，有助于研究血漿蛋白的生理功能等,。

蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)定量分析：1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記，組織/細(xì)胞破碎,，提取,、提純目的蛋白質(zhì)（基于SILAC的乙酰化修飾組學(xué)定量）,。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 對(duì)多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記（基于iTRAQ的乙酰化修飾組學(xué)定量）,。4. 使用高效特異性乙?；贵w對(duì)乙酰化修飾肽段進(jìn)行免疫富集,。5. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?；亩芜M(jìn)行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,，比對(duì)不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町悾?duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)磷酸化修飾具有靈活的特性,。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析：組蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì)，是染色質(zhì)的關(guān)鍵成分,，是DNA包裝的結(jié)構(gòu)單位,。組蛋白的功能受其翻譯后修飾介導(dǎo)。組蛋白翻譯后修飾包括通過絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化,，賴氨酸或精氨酸的甲基化，賴氨酸的乙?；兔撘阴,；嚢彼岬姆核鼗突酋,；葘?duì)組蛋白進(jìn)行的共價(jià)修飾,。組蛋白這些修飾對(duì)于核完整性至關(guān)重要，因?yàn)樗鼈兛梢哉{(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)并募集參與基因調(diào)節(jié),、DNA修復(fù)和染色體濃縮的酶,。組蛋白的翻譯后修飾大多位于N末端的尾巴上，因?yàn)镹末端是蛋白質(zhì)中比較暴露和比較靈活的區(qū)域,。分析組蛋白翻譯后修飾有助于探索組蛋白修飾與染色體濃縮,、DNA轉(zhuǎn)錄等生物功能之間的關(guān)系。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)磷酸化修飾具有簡(jiǎn)單的特性。貴州棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)

蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,，將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上,。南京琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

蛋白磷酸化檢測(cè)方法：一、Western Blot檢測(cè)方法優(yōu)勢(shì)：1. WB方法簡(jiǎn)便,，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室具備Western Blot設(shè)備條件,。2. 許多磷酸化抗體十分靈敏，能夠檢測(cè)低至10ug的蛋白樣品,。3. 對(duì)于豐度低的蛋白,，可以先通過IP使用目標(biāo)蛋白的抗體對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行富集，再進(jìn)行WB檢測(cè)被磷酸化的蛋白,，檢測(cè)效率可以提高幾倍甚至幾十倍,。二、質(zhì)譜檢測(cè)方法：Western Blot的方法雖然簡(jiǎn)便,，但是對(duì)于大規(guī)模分析復(fù)雜的生物樣品的磷酸化水平就不再適用了,。而質(zhì)譜卻能很好的解決這一問題。依靠高準(zhǔn)確度質(zhì)譜儀,，如今快速準(zhǔn)確分析細(xì)胞中高豐度蛋白的磷酸化修飾已是非常簡(jiǎn)單的事,。具體的檢測(cè)方法為先通過SDS-PAGE膠，或者2D-PAGE膠等分離目標(biāo)蛋白,，將含有目標(biāo)蛋白的條帶切下,，胰酶消化，LC-MS/MS檢測(cè)分析蛋白序列和相應(yīng)位點(diǎn)的磷酸化修飾,。這個(gè)方法適用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)蛋白的磷酸化水平,。南京琥珀酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

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