PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):是一種基于Orbitrap為表示的高分辨,、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),,首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標(biāo)肽段的母離子,,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,,然后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì),、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,,即可對目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進行相對(一定)定量。從而實現(xiàn)對復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進行準(zhǔn)確地特異性分析。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用,?濟南新型修飾蛋白組學(xué)研究方法
定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景和意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段,。而這些研究往往離不開對細(xì)胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達量的研究,。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達水平變化的研究,,識別功能模塊和路徑,,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進行鑒定和定量,。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達分析提供了更可靠,、動態(tài)范圍更廣的研究手段?;谫|(zhì)譜技術(shù),,科學(xué)家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,來了解細(xì)胞,、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動力學(xué),。濟南新型修飾蛋白組學(xué)研究方法定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用高電場使質(zhì)譜進樣端的毛細(xì)管柱流出的液滴帶電,,在N2氣流的作用下,,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,,表面電荷密度不斷增加,,直至產(chǎn)生的庫侖力與液滴表面張力達到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,,這一過程不斷重復(fù)使液滴非常細(xì)小呈噴霧狀,,這時液滴表面的電場非常強大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進入質(zhì)量分析器,。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,,一般說來,肽段的混合物經(jīng)過液相色譜分離后,,經(jīng)過偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析,,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時間一般較長。目前,,許多實驗室兩種質(zhì)譜方法連用,,獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列,設(shè)計探針或引物來獲得有意義的基因,。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入,,又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn),主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進行改進與重新組合。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(labelfree)定量策略,,標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記兩種,。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中,,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達異常,。定量蛋白質(zhì)組學(xué)就是把一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進行精確的定量和鑒定。非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù),,Labelfree定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析,,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),,比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強度,,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進行相對定量。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,。
Labelfree非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)特點:(1)不需要標(biāo)記處理,,操作簡單,成本低,、實驗周期短,;(2)每個樣品單獨處理、上機,;(3)可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,,樣品類型不受限制;(4)對單個樣品的蛋白總量要求相對較低,,對于組織本身蛋白量不高,,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品,;(5)定性沒有問題,,但是定量的準(zhǔn)確性較標(biāo)記定量稍差,會受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響,;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個樣本),。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成,、定位,、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。對人類而言,,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究終究要服務(wù)于人類的健康,。濟南新型修飾蛋白組學(xué)研究方法
蛋白質(zhì)組學(xué)研究的首要任務(wù)是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠,、有效的技術(shù),。濟南新型修飾蛋白組學(xué)研究方法
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質(zhì)譜分析,,能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量,,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù),。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。濟南新型修飾蛋白組學(xué)研究方法
上海拜譜生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),,是一家服務(wù)型公司,。公司業(yè)務(wù)分為多組學(xué)服務(wù),質(zhì)譜檢測,,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué)等,,目前不斷進行創(chuàng)新和服務(wù)改進,,為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司將不斷增強企業(yè)重點競爭力,,努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識,,遵守行業(yè)規(guī)范,植根于商務(wù)服務(wù)行業(yè)的發(fā)展,。拜譜生物秉承“客戶為尊,、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先,、技術(shù)為實”的經(jīng)營理念,,全力打造公司的重點競爭力。