定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景和意義:從生命活動(dòng)的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段,。而這些研究往往離不開對(duì)細(xì)胞,、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究,。對(duì)處不同時(shí)期,、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究,識(shí)別功能模塊和路徑,,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,,這些研究都需要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠,、動(dòng)態(tài)范圍更廣的研究手段,?;谫|(zhì)譜技術(shù),科學(xué)家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,,來(lái)了解細(xì)胞,、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)并帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破,。河南PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)報(bào)價(jià)
蛋白質(zhì)組(Proteome)的概念指由一個(gè)基因組(genome),,或一個(gè)細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)(Protein).蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別,,它隨著組織,、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變.在轉(zhuǎn)錄時(shí),一個(gè)基因可以多種mRNA形式剪接,,并且,,同一蛋白可能以許多形式進(jìn)行翻譯后的修飾.故一個(gè)蛋白質(zhì)組不是一個(gè)基因組的直接產(chǎn)物,蛋白質(zhì)組中蛋白質(zhì)的數(shù)目有時(shí)可以超過(guò)基因組的數(shù)目.蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)處于早期“發(fā)育”狀態(tài),,這個(gè)領(lǐng)域的**否認(rèn)它是單純的方法學(xué),,就像基因組學(xué)一樣,不是一個(gè)封閉的,、概念化的穩(wěn)定的知識(shí)體系,,而是一個(gè)領(lǐng)域.蛋白質(zhì)組學(xué)集中于動(dòng)態(tài)描述基因調(diào)節(jié),對(duì)基因表達(dá)的蛋白質(zhì)水平進(jìn)行定量的測(cè)定,,鑒定疾病,、藥物對(duì)生命過(guò)程的影響,,以及解釋基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制.作為一門科學(xué),。濟(jì)南定量蛋白組學(xué)研究方法蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。
蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),,也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑,。通過(guò)對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,,它們可成為新藥物設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn),,或者也會(huì)為疾病的早期診斷提供分子標(biāo)志。確實(shí),,那些世界范圍內(nèi)銷路比較好的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點(diǎn)為某種蛋白質(zhì)分子,。因此,蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,,也能為人類健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益,。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐,,并將帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破,。為幫助生命科學(xué)領(lǐng)域的工作者全方面掌握蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)與方法,、實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn)、研究前沿與熱點(diǎn),,包括雙向凝膠電泳,、等電聚焦、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術(shù),。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離,,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開,。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置,,它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究,蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用,,細(xì)胞分化凋亡研究,,致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究,療效監(jiān)測(cè),,新藥開發(fā),,病癥研究,蛋白純度檢查,,小量蛋白純化,,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來(lái)經(jīng)過(guò)多方面改進(jìn)已成為研究蛋白質(zhì)組的比較有使用價(jià)值的關(guān)鍵方法,。蛋白質(zhì)組學(xué)在應(yīng)用中,,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。
非標(biāo)定量法(Label-free)是通過(guò)比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度,,分析不同來(lái)源樣品蛋白的數(shù)量變化,,認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,,通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來(lái),從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量,。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法,,發(fā)展比較早,,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ),,各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正,。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ),計(jì)算每個(gè)肽段的信號(hào)強(qiáng)度在LC-MS上的積分,。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,,如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化,、蛋白質(zhì)折疊等等,。武漢新型修飾蛋白組學(xué)分析研究
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有生物質(zhì)譜,。河南PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)報(bào)價(jià)
蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞),、線粒體蛋白組,、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)蛋白組進(jìn)行定性,、定量,、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,,揭示生物學(xué)功能,、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測(cè)蛋白的上,、下游變化關(guān)系,。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測(cè)的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況,。常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),,高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),,多肽組學(xué),。河南PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)報(bào)價(jià)
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