蛋白質(zhì)磷酸化修飾類型：根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同,，可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類,，即O-磷酸鹽蛋白質(zhì)、N-磷酸鹽蛋白質(zhì),、?；姿猁}蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì)。1,、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過羥氨基酸（如絲氨酸,、蘇氨酸或酪氨酸）的磷酸化形成。2,、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過精氨酸,、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3,、 ?；姿猁}蛋白質(zhì)通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4,、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過半胱氨酸磷酸化形成,。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法：免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點分析時應(yīng)該注意些什么問題,？山東磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

蛋白翻譯后修飾：蛋白質(zhì)氨基酸序列的特定位置可以與化學(xué)基團或者小分子量的蛋白共價結(jié)合從而發(fā)生蛋白質(zhì)翻譯后修飾（post-translational modifications，PTMs）,。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)生物合成的一個步驟,，翻譯后多肽鏈在成為成熟的蛋白質(zhì)產(chǎn)品之前要經(jīng)過修飾，PTMs的類型包括磷酸化,、乙?；⑻腔⒎核鼗投蜴I等等,，它導(dǎo)致蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的大幅增加,。對于任何給定的蛋白質(zhì)，各種各樣的PTMs提供了一種通過改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能來促進細胞快速變化的方法,。PTMs在信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和周轉(zhuǎn)率、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)識別和相互作用以及空間定位中起著至關(guān)重要的作用,。江蘇蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)類型蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理,、化學(xué)性質(zhì)。

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析：蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達水平變化,，許多至關(guān)重要的生命進程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制,，更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控,，因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個重要前提,。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變，通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量,。同時,，發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣，所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進行富集,。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析自中而下分析策略：自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析,。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同，直到得到純化的組蛋白,。提取組蛋白后,，用GluC進行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜（WCX-HILIC）與配備電子轉(zhuǎn)移解離（ETD）的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機聯(lián)用,，對樣品進行理想的分離,。譜識別可以用傳統(tǒng)的軟件進行，但是由于估計適當(dāng)?shù)腻e誤發(fā)現(xiàn)率的問題,，需要對結(jié)果進行過濾。自上而下的技術(shù)可以直接引入完整的蛋白質(zhì)并在串聯(lián)質(zhì)譜儀上對其進行片段化,，不需要蛋白質(zhì)水解消化,。目前，有兩種完全分離蛋白質(zhì)的方法：離線和在線,。前者用四維分離法,，后者用WCX-HILIC。在早期的研究中,，乙?；揎椧恢北徽J為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾。

質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾原理：相較于沒有發(fā)生翻譯后修飾的蛋白，翻譯后修飾蛋白會在特定肽段序列有分子量的增加,。在蛋白翻譯后修飾方式的質(zhì)譜分析過程中,，蛋白會首先被酶切成肽段，然后進入質(zhì)譜進行分析,；通過質(zhì)譜分析,，得到的是一系列肽段的相對分子質(zhì)量信息。對于某一個特定的肽段而言,，在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下其序列信息和分子量是確定的,，當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后，例如磷酸化修飾,，因為磷酸根的分子量也是確定的,，所以在質(zhì)譜檢測過程中如果發(fā)現(xiàn)部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量，則可以假設(shè)這個肽段發(fā)生了磷酸化修飾,，再通過二級或多級質(zhì)譜的譜圖進行二次確認即可實現(xiàn)翻譯后修飾類型鑒定及修飾位點分析等,。蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)對細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著重要的作用,。湖北蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)分析研究

自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析,。山東磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)：磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,。在哺乳動物的細胞生命周期中,，至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細胞代謝過程,，且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān),。因此，對磷酸化蛋白質(zhì)組進行定量研究,，尋找差異表達的磷酸化蛋白質(zhì),，有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。山東磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法