蛋白質(zhì)磷酸化修飾定義,?在哺乳動物細(xì)胞生命周期中,,大約有1/3的蛋白質(zhì)發(fā)生過磷酸化修飾,,在脊椎動物基因中,,約有5%的基因編碼的蛋白質(zhì)是參與磷酸化和去磷酸化過程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過激發(fā),、調(diào)節(jié)諸多信號通路進(jìn)而參與調(diào)控生物體的生長、發(fā)育,、逆境應(yīng)激,、疾病發(fā)生等多種生命過程,,一直是生物學(xué)研究的重點與熱點。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(tuán)(P04)轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S,、蘇氨酸T,、酪氨酸Y),,從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過程,。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合。上海蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)鑒定
琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組鑒定:蛋白質(zhì)琥珀?;揎検切陆l(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾,,是在琥珀酰輔酶 A 的介導(dǎo)下將一個負(fù)電荷四碳琥珀酰基轉(zhuǎn)移到賴氨酸殘基的伯胺上的過程,。賴氨酸琥珀?;谡婧思?xì)胞及原核細(xì)胞中普遍存在,,參與調(diào)控包括三羧酸循環(huán),,氨基酸代謝以及脂肪酸代謝在內(nèi)的多個代謝信號通路,。琥珀?;鞍踪|(zhì)組以組織,、細(xì)胞等較為復(fù)雜樣本為研究對象,,目的在于鑒定樣品中發(fā)生琥珀?;揎椀牡鞍踪|(zhì)以及相應(yīng)的琥珀?;揎椢稽c,。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點:采用主流抗體親和富集方法,,特異性高,,富集效率好,。上海蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)有什么重要的作用呢?
琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點:采用主流抗體親和富集方法,,特異性高,,富集效率好,;通過高分辨率,、高掃描速度的質(zhì)譜,,對富集的琥珀?;亩芜M(jìn)行大規(guī)模鑒定,;結(jié)合常用的定量技術(shù)可對不同樣品間的琥珀?;讲町愡M(jìn)行定量比較,。適用范圍:藥物作用靶點研究;疾病標(biāo)志物篩選,;植物脅迫/抗逆研究;作用機(jī)制研究,;要求物種具有蛋白質(zhì)參考數(shù)據(jù)庫、EST序列(轉(zhuǎn)錄組)或基因組注釋信息,。應(yīng)用方向:線粒體代謝、生物合成與代謝,、中心代謝途徑,、炎癥與疾病,。
乙?;揎椀鞍捉M學(xué)介紹:蛋白質(zhì)乙酰化(Acetylation)是蛋白在乙?;D(zhuǎn)移酶(或非酶)的催化下,,將乙?;鶊F(tuán)轉(zhuǎn)移并添加在蛋白賴氨酸殘基或蛋白N端上的過程,,在調(diào)控蛋白質(zhì)功能,、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)中起重要作用,。乙?;揎椫饕譃閮深悾旱鞍譔端的乙?;揎椇偷鞍踪嚢彼嵘系囊阴,;揎?。N端乙?;揎棿蟛糠职l(fā)生在真核生物的蛋白上,,由N乙酰轉(zhuǎn)移酶(NATs)催化,;賴氨酸上的乙?;揎検且粋€可逆的過程,主要由賴氨酸乙?;?KATs)和賴氨酸去乙?;?KDACs)催化。蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點:檢測特異性高,。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用:泛素化,、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,,作為近年來生物化學(xué)研究的一個重大成果,,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點,。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量,。技術(shù)優(yōu)勢:高特異性的修飾抗體;高分辨率,、高靈敏度質(zhì)譜儀,;鑒定通量高,;可與代謝組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析,。目前對乙?;揎椀墓δ苎芯恐饕性趯?xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控,以及對代謝通路的調(diào)控這兩個方面,。上海蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)乙酰化也是一種可逆的酶促反應(yīng)過程,。上海蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (Protein translational modifications,PTMs) 通過功能基團(tuán)或蛋白質(zhì)的共價添加,、調(diào)節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個蛋白質(zhì)的降解來增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,。這些修飾包括磷酸化、糖基化,、泛素化,、亞硝基化、甲基化,、乙?;⒅|(zhì)化和蛋白水解,,幾乎影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)制的所有方面,。因此,識別和理解 PTM 在細(xì)胞生物學(xué)和疾病療理和預(yù)防的研究中至關(guān)重要,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加,。PTMs 是一種化學(xué)修飾,在功能蛋白質(zhì)組中發(fā)揮關(guān)鍵作用,,因為它們調(diào)節(jié)活性,、定位以及與其他細(xì)胞分子(如蛋白質(zhì)、核酸,、脂質(zhì)和輔助因子)的相互作用,。上海蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)鑒定