轉(zhuǎn)錄組測(cè)序推薦的測(cè)序數(shù)據(jù)量,？轉(zhuǎn)錄組測(cè)序所需數(shù)據(jù)量與所研究物種的基因組大小有關(guān),，基因組越大，則所需數(shù)據(jù)量越大,。按照我們的經(jīng)驗(yàn)來(lái)說(shuō)：常規(guī)物種一般建議6G數(shù)據(jù)即可；基因組較大的物種推薦8G以上數(shù)據(jù)，比如：小麥建議10G數(shù)據(jù)起,，甘蔗、甘薯建議至少8G數(shù)據(jù),。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序必須做生物學(xué)重復(fù)么,？需要幾個(gè)重復(fù)？生物學(xué)重復(fù)是生物實(shí)驗(yàn)所必須的,，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序也不例外,，至少3 次生物學(xué)重復(fù)。準(zhǔn)備生物重復(fù)樣品時(shí),，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)的預(yù)先設(shè)計(jì)和控制,，盡可能將與實(shí)驗(yàn)處理無(wú)關(guān)的背景條件控制在同一水平，減少批次效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響,。轉(zhuǎn)錄組廣義上指在某一生理?xiàng)l件下,，細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)物的組合。北京單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析價(jià)格

轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的方法：轉(zhuǎn)錄組學(xué)是一門在整體水平上研究細(xì)胞中所有基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科,。在早期,，由于測(cè)序價(jià)格昂貴、基因序列數(shù)目有限,，轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究者只能進(jìn)行極少數(shù)特定基因的結(jié)構(gòu)功能分析和表達(dá)研究,。近十幾年，分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展使高通量分析成為可能,，這為真正意義上的轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究奠定了基礎(chǔ),。這些高通量研究方法主要可以分為兩類：一類是基于這類方法包括表達(dá)序列標(biāo)簽技術(shù)、基因表達(dá)系列分析技術(shù),、大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù),、RNA測(cè)序技術(shù)其中。湖北RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)服務(wù)轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于非生物環(huán)境關(guān)系研究,、植物與微生物,、在表型鑒定中的應(yīng)用,、代謝途徑及功能基因組研究。

宏轉(zhuǎn)錄組分析：從以G為單位的高通量測(cè)序數(shù)據(jù)中獲取研究所需的微生物種類,、基因,、通路等信息是進(jìn)行宏轉(zhuǎn)錄組研究必須經(jīng)歷的一步。現(xiàn)在網(wǎng)絡(luò)上分析組學(xué)數(shù)據(jù)的工具五花八門,。能否從眾多組學(xué)工具中選擇出適合分析宏轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的軟件,，能否搭建一套完整、快速,、高效,、靈敏、高精確的宏轉(zhuǎn)錄組分析pipline,，直接關(guān)乎到后期數(shù)據(jù)分析的進(jìn)行,。這種技術(shù)不只具有宏基因組技術(shù)的全部?jī)?yōu)點(diǎn)，可以檢測(cè)環(huán)境中的活性微生物,、活性轉(zhuǎn)錄本以及活性功能進(jìn)行研究,，還可以比較不同環(huán)境下的差異表達(dá)基因和差異功能途徑，揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機(jī)制,，探索環(huán)境與微生物之間的互作機(jī)理,。

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組關(guān)鍵步驟：?jiǎn)渭?xì)胞的分離和捕獲：溫和分離，稀有細(xì)胞,。轉(zhuǎn)錄本的捕獲和擴(kuò)增：RNA測(cè)序需要0.1-1.0ug total RNA,，捕獲效率10%（5-**NA測(cè)序需要1ng DNA，極限稀釋加移液分離單細(xì)胞,；顯微操作分選單細(xì)胞,；流式分選帶有表面Marker的單細(xì)胞；激光切割實(shí)體組織,；微流控技術(shù),；磁珠捕獲，主要用于CTC,。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)基本概念：普通轉(zhuǎn)錄組的思路也可以應(yīng)用到單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組,。普通轉(zhuǎn)錄組相當(dāng)于把一群細(xì)胞混合到一起去提取RNA，獲得的是每個(gè)細(xì)胞中RNA表達(dá)量的平均值,。單細(xì)胞是把每個(gè)細(xì)胞單獨(dú)分出來(lái)去提取RNA,，然后建庫(kù)測(cè)序，獲得是是單個(gè)細(xì)胞的表達(dá)值,。在每個(gè)細(xì)胞里面基因的表達(dá)具有隨機(jī)性,，且存在異質(zhì)性。轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況,。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因數(shù)目多少比較合理,？不同的處理,，不同的研究目標(biāo)，差異基因的數(shù)目是不同的,，從幾十個(gè)到幾千個(gè)都有可能,。但是如果差異基因數(shù)目是個(gè)位數(shù)或者上萬(wàn)，那么就需要和分析人員溝通一下,，查一查是否有問(wèn)題,。轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因太多,，注釋信息太雜亂,，怎么挑選目標(biāo)基因？對(duì)不同的差異組合進(jìn)行維恩圖分析,，挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對(duì)象,；根據(jù)前人的文獻(xiàn)報(bào)道，挑選相關(guān)差異基因,，不要局限在自己研究的物種上,。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)： Anydeplete技術(shù)首先通過(guò)隨機(jī)引物進(jìn)行一鏈合成，一鏈合成引入核苷酸類似物,，用于酶切打斷,，二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭,，接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物,，用于酶切降解。當(dāng)形成單鏈文庫(kù)后,，設(shè)計(jì)特異性引物與rRNA形成文庫(kù)結(jié)合,，一輪退火延伸，rRNA文庫(kù)形成雙鏈結(jié)構(gòu),。circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子,。武漢circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)

轉(zhuǎn)錄組即一個(gè)活細(xì)胞所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和，是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段,。北京單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析價(jià)格

宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)也稱為環(huán)境轉(zhuǎn)錄組學(xué),，指從整體水平上研究某一特定環(huán)境、特定時(shí)期菌群群體全部基因轉(zhuǎn)錄情況以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律,，以揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機(jī)制,，探索環(huán)境與微生物之間的相互作用機(jī)理。其適用范圍包括人體微生態(tài),、環(huán)境,、工業(yè)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域,。宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)以生態(tài)環(huán)境中的全部RNA為研究對(duì)象,，避開(kāi)了微生物分離培養(yǎng)困難的問(wèn)題,，能有效的擴(kuò)展微生物資源的利用空間。應(yīng)用領(lǐng)域：包括腸道微生物,、口腔微生物,、糞便微生物、人體組織微生物,。北京單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析價(jià)格