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來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-16

糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性,。不同的糖鏈可以連接到同一位點(diǎn)上,,不同位點(diǎn)可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上,。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析,。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),,在電泳上會(huì)出現(xiàn)分散的條帶,,導(dǎo)致信號(hào)分散。此外,,對(duì)低豐度蛋白質(zhì)的識(shí)別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對(duì)糖基化蛋白的糖基化肽段進(jìn)行分離和富集,,消除糖基化的異質(zhì)性及其對(duì)質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點(diǎn),。從而實(shí)現(xiàn)高通量糖蛋白和糖基化位點(diǎn)的識(shí)別,。常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有:a. 凝集素親和技術(shù);b. 肼化學(xué)富集,;c. 親水性相互作用色譜法,;d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測(cè)定方法有:a. PNGase F酶法,;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法,。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性,。杭州蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)價(jià)錢

蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長(zhǎng)的不同時(shí)期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化,。然而,許多生命過程不僅受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制,,還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制,。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提,。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過程,。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化,、泛素化和磷酸化,。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn),?;诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn),主要利用凝膠,、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究,。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上,、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析,。深圳蛋白質(zhì)丙二酰化修飾組學(xué)分析研究泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用:泛素化,、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,,作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn),。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量,。技術(shù)優(yōu)勢(shì):高特異性的修飾抗體;高分辨率,、高靈敏度質(zhì)譜儀,;鑒定通量高;可與代謝組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析,。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾類抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量,。技術(shù)優(yōu)勢(shì):1,、高特異性的修飾類泛抗體;2,、高分辨率,、高靈敏度質(zhì)譜儀;應(yīng)用領(lǐng)域:泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期,、增殖,、細(xì)胞凋亡、分化,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),、信號(hào)傳遞,、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)的調(diào)控,。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān),。因此,作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,,它已然成為研究,、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn)。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時(shí)其分子質(zhì)量會(huì)發(fā)生響應(yīng)的改變,,通過質(zhì)譜能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量,。

蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):乙?;揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,,對(duì)細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用。此外,,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對(duì)蛋白乙?;b定的影響,再結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩?,從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模乙酰化的鑒定及定量,。蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解,。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,,調(diào)控包括細(xì)胞周期,、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng),。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。杭州蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)價(jià)錢

質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。杭州蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)價(jià)錢

蛋白質(zhì)翻譯后修飾加入的官能團(tuán)反應(yīng)有:1,、乙酰化——通常于蛋白質(zhì)的N末端加入乙酰,。2,、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基。3,、甲基化——烷基化中常見的一種,,在賴氨酸、精氨酸等的側(cè)鏈氨基上加入甲基,。4,、生物素化——用生物素附加物令保存的賴氨酸酰化,。5,、谷氨酸化——在谷氨酸與導(dǎo)管素及其他蛋白質(zhì)之間建立共價(jià)鍵。6,、甘氨酸化——在一個(gè)至超過40種甘氨酸與導(dǎo)管素的C末端建立共價(jià)鍵,。7、糖化——將糖基加入天冬酰胺,、羥離氨酸,、絲氨酸或蘇氨酸,形成糖蛋白,。8,、異戊二烯化——加入如法呢醇及四異戊二烯等異戊二烯。9,、硫辛酸化——附著硫辛酸的功能性,。杭州蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)價(jià)錢