翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,、乙酸酯,、酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解,、信號傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程,、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,、糖基化,、泛素化、亞硝基化,、甲基化,、乙酰化,、脂質(zhì)化和蛋白水解,。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點(diǎn))在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要,。乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響,。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定
琥珀酰化修飾蛋白質(zhì)組:蛋白質(zhì)琥珀?;╯uccinylation)修飾是指琥珀?;鶊F(tuán)供體(如琥珀酰輔酶A)通過酶學(xué)或者非酶學(xué)的方式將琥珀酰基團(tuán)共價(jià)結(jié)合到底物蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基的過程,。琥珀?;揎椯x予賴氨酸基團(tuán)2個(gè)負(fù)電荷,能夠引發(fā)更多蛋白質(zhì)特性的改變,,且琥珀?;鶊F(tuán)空間結(jié)構(gòu)較大,對于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響更為明顯,。在真核和原核生物中,,琥珀酰化是一種保守的修飾類型,。琥珀?;鸵阴;哂蟹浅?qiáng)的相關(guān)性,,在已有的研究中,,大量發(fā)生琥珀酰化的位點(diǎn)同時(shí)也能檢測到乙?;揎?。琥珀酰化參與了很多關(guān)鍵能量代謝途徑(包括三羧酸循環(huán),、糖代謝等),,影響線粒體中的代謝過程,對線粒體失調(diào)相關(guān)的疾病的研究具有重要價(jià)值,。江蘇蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析研究蛋白質(zhì)磷酸化對闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義,。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (Protein translational modifications,PTMs) 通過功能基團(tuán)或蛋白質(zhì)的共價(jià)添加,、調(diào)節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個(gè)蛋白質(zhì)的降解來增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,。這些修飾包括磷酸化、糖基化,、泛素化,、亞硝基化、甲基化,、乙?;⒅|(zhì)化和蛋白水解,,幾乎影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)制的所有方面,。因此,識別和理解 PTM 在細(xì)胞生物學(xué)和疾病療理和預(yù)防的研究中至關(guān)重要,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加,。PTMs 是一種化學(xué)修飾,在功能蛋白質(zhì)組中發(fā)揮關(guān)鍵作用,,因?yàn)樗鼈冋{(diào)節(jié)活性,、定位以及與其他細(xì)胞分子(如蛋白質(zhì)、核酸,、脂質(zhì)和輔助因子)的相互作用,。
乙酰化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用方向:1,、乙酰化修飾與細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控,、表觀調(diào)控,、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究,。2、乙?;鸬拇x疾病,、代謝紊亂發(fā)生等疾病機(jī)理研究。乙?;飳W(xué)意義:1,、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用,;2,、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3,、調(diào)節(jié)酶活性,;4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位,。生物領(lǐng)域各個(gè)研究方面,,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機(jī)制,,生長發(fā)育機(jī)制,,育種保護(hù)研究等;2,、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,,致病機(jī)理研究等。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性,。
泛素化修飾PRM定量驗(yàn)證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動。首先對泛素化的蛋白進(jìn)行胰酶消化,,在賴氨酸的修飾位點(diǎn)上會產(chǎn)生兩個(gè)甘氨酸的殘基(K-GG),,利用對泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復(fù)雜樣本中的泛素化肽段,,結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法,,實(shí)現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析,。在細(xì)胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上,。貴州蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)質(zhì)譜鑒定
蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸,、或酪氨酸殘基上。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用:泛素化,、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,,作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn),。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量,。技術(shù)優(yōu)勢:高特異性的修飾抗體;高分辨率,、高靈敏度質(zhì)譜儀,;鑒定通量高;可與代謝組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析,。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定