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哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-20

蛋白質(zhì)組學(xué)概念:蛋白質(zhì)組學(xué)(英語(yǔ):proteomics,又譯作蛋白質(zhì)體學(xué)),是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,,研究細(xì)胞,、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個(gè)詞的組合,意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì),。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,,包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,翻譯后的修飾,,蛋白與蛋白相互作用等,,由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過(guò)程的整體而全方面的認(rèn)識(shí),。蛋白質(zhì)組學(xué),,指對(duì)某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白組究竟研究原因:首先,,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,,就簡(jiǎn)單地測(cè)試了酵母中mRNA和對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,,經(jīng)過(guò)平均后r值只為0.4。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì),。蛋白組究竟研究的是什么呢,?第1,蛋白質(zhì)定性,,或者說(shuō)大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中,;第2,蛋白質(zhì)定量,,也就是大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對(duì)含量),;第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,,這些修飾主要包括磷酸化,,泛素化,糖基化,,乙?;鹊龋舶▽?duì)這些翻譯后修飾的定量研究,。武漢定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)組學(xué)可以通過(guò)系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達(dá)和翻譯后修飾變化對(duì)疾病的影響,。

iTRAQ/TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)優(yōu)勢(shì):1、結(jié)果可靠:基于高靈敏度和高分辨的串聯(lián)質(zhì)譜方法,,定性與定量同步進(jìn)行,,同時(shí)得出定性和定量結(jié)果,重復(fù)樣品間的蛋白表達(dá)量相關(guān)性高,;2,、靈敏度高:分級(jí)分離,,降低樣品復(fù)雜度,相比凝膠電泳觀測(cè)到的蛋白變化在2倍以上,,iTRAQ計(jì)算出的蛋白變化在1.3-1.6倍之間,,可檢測(cè)低豐度蛋白;3,、分離能力強(qiáng):可分離出酸/堿性蛋白,,小于10KDa或大于200KDa的蛋白、難溶性蛋白等,;4,、自動(dòng)化程度高:液質(zhì)聯(lián)用,自動(dòng)化操作,,分析速度快,,分離效果好。

非標(biāo)定量法(Label-free)是通過(guò)比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度,,分析不同來(lái)源樣品蛋白的數(shù)量變化,,認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,,通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來(lái),從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量,。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法,,發(fā)展比較早,,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ),,各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正,。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ),計(jì)算每個(gè)肽段的信號(hào)強(qiáng)度在LC-MS上的積分,。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進(jìn)行相關(guān)研究和日常工作,。

蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)現(xiàn)已被普遍應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域,對(duì)理解細(xì)胞生長(zhǎng),、分化,、代謝、衰老與病變有著重要作用,。尤其在疾病的研究中,蛋白質(zhì)組學(xué)可以通過(guò)系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達(dá)和翻譯后修飾變化對(duì)疾病的影響,,從而在分子層面對(duì)疾病進(jìn)行分型,,以起到對(duì)個(gè)性化療理研究的積極推進(jìn)作用。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用是當(dāng)今迅猛發(fā)展的研究領(lǐng)域之一,,隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步和普遍應(yīng)用,,基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的醫(yī)療有望在不久的將來(lái)應(yīng)用于大規(guī)模的臨床實(shí)踐中,。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個(gè)詞的組合,。武漢定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來(lái)看),,就是對(duì)蛋白質(zhì)的定性定量分析。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐,,并將帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破,。為幫助生命科學(xué)領(lǐng)域的工作者全方面掌握蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)與方法、實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn),、研究前沿與熱點(diǎn),,包括雙向凝膠電泳、等電聚焦,、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術(shù),。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,,把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開(kāi),。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究,,蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用,,細(xì)胞分化凋亡研究,致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究,,療效監(jiān)測(cè),,新藥開(kāi)發(fā),病癥研究,,蛋白純度檢查,,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面,。近年來(lái)經(jīng)過(guò)多方面改進(jìn)已成為研究蛋白質(zhì)組的比較有使用價(jià)值的關(guān)鍵方法,。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法