什么叫轉(zhuǎn)錄組學(xué),?廣義轉(zhuǎn)錄組是指生命單元(通常是一種細(xì)胞)中所有按基因信息單元轉(zhuǎn)錄和加工的RNA分子(包括編碼和非編碼RNA功能單元),或者是一個(gè)特定細(xì)胞所有轉(zhuǎn)錄本的總和.它的研究對象就是這些RNA與蛋白質(zhì)分子和它們所組成的基因功能網(wǎng)絡(luò)以及它們與細(xì)胞功能的關(guān)系.而狹義轉(zhuǎn)錄組是指可直接參與翻譯蛋白質(zhì)的mRNA總和,。轉(zhuǎn)錄組是干什么用的,,和表達(dá)譜有什么區(qū)別,?轉(zhuǎn)錄組,,指細(xì)胞某一時(shí)期所有基因的轉(zhuǎn)錄水平,。轉(zhuǎn)錄組學(xué),,是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科,。簡而言之,,轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)能有效的擴(kuò)展微生物資源的利用空間,。貴州外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
全轉(zhuǎn)錄組測序?yàn)槭裁葱枰獦?gòu)建兩個(gè)文庫,?全轉(zhuǎn)錄組測序需要構(gòu)建2個(gè)測序文庫,一個(gè)小RNA文庫和一個(gè)去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,,然后分別上機(jī)測序,。小RNA長度較短,一般小于50nt,,采用測序策略為50SE,。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,,可達(dá)幾萬,,通過片段化構(gòu)建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA,、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,,包括mRNA和非編碼RNA,。貴州外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)相對于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺,轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序無需預(yù)先針對已知序列設(shè)計(jì)探針,。
宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)適用范圍包括人體微生態(tài),、環(huán)境、工業(yè),、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域,。宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)以生態(tài)環(huán)境中的全部RNA為研究對象,避開了微生物分離培養(yǎng)困難的問題,,能有效的擴(kuò)展微生物資源的利用空間,。應(yīng)用領(lǐng)域:包括腸道微生物、口腔微生物,、糞便微生物,、人體組織微生物。宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組的概念:宏轉(zhuǎn)錄組是特定時(shí)期,、環(huán)境樣本,、組織樣本中所有的微生物的RNA(轉(zhuǎn)錄本)的匯合。通過對這些轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行大規(guī)模高通量測序,,可以直接獲得環(huán)境中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的微生物轉(zhuǎn)錄組信息。
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢:相比基因芯片和標(biāo)記的堿基序列的測序方法,,RNA-seq具有一定的優(yōu)越性,。與基因芯片相比,,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用來測量基因的表達(dá)水平情況,還可以揭示未知的轉(zhuǎn)錄組和拼接亞型,,并為選擇性拼接亞型提供定量分析,。相對于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺,轉(zhuǎn)錄組測序無需預(yù)先針對已知序列設(shè)計(jì)探針,,即可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動(dòng)進(jìn)行檢測,,提供更精確的數(shù)字化信號、更高的檢測通量以及更普遍的檢測范圍,,是目前深入研究復(fù)雜性轉(zhuǎn)錄組的強(qiáng)大工具,。鑒于這些優(yōu)勢,RNA-Seq很快就被應(yīng)用到關(guān)于瘤病相關(guān)研究的多個(gè)方面,。宏轉(zhuǎn)錄組是特定時(shí)期,、環(huán)境樣本、組織樣本中所有的微生物的RNA(轉(zhuǎn)錄本)的匯合,。
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢:RNA-seq技術(shù)可以檢測到低水平表達(dá),、未識別的轉(zhuǎn)錄子和新拼接亞型基因。另一方面,,與基因芯片相比,,RNA-Seq有一個(gè)更廣的檢測動(dòng)態(tài)范圍,可以研究編碼和非編碼RNA,,更易于基因網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建,、發(fā)現(xiàn)選擇性剪切轉(zhuǎn)錄物,檢測到等位基因的具體表達(dá)方式,,也可以用來提取基因型信息,。在RNA-Seq單細(xì)胞研究中,一個(gè)主要優(yōu)勢是可以分析整個(gè)轉(zhuǎn)錄序列,,而不是有限制數(shù)量的基因,,并且,研究DNA和RNA的方法并不是相互排斥的,,他們可以相互結(jié)合使用,,產(chǎn)生更多的生物學(xué)上重要的信息。RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)即對轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序和分析,。貴州外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
轉(zhuǎn)錄組學(xué)是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段,。貴州外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
全長轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序:由于在轉(zhuǎn)錄組研究中通常所使用的第二代測序技術(shù)具有測序讀長的限制,因此在進(jìn)行測序之前,,需要先將樣本的mRNA打碎為小片段,,之后再通過與參考基因組比對或拼接的方式識別轉(zhuǎn)錄本,這就會造成一定的錯(cuò)誤比例,,同時(shí)在也很難區(qū)分單堿基水平的差異,。全長轉(zhuǎn)錄組測序的優(yōu)勢:1,、全方面鑒定可變剪切;2,、發(fā)現(xiàn)更多新基因,;3、有效改善基因組注釋,;4,、鑒定更多的LncRNA;5,、準(zhǔn)確定位融合基因,。研究思路:由于全長轉(zhuǎn)錄組測序是基于第三代測序技術(shù),因而其成本依然較高,,如果全部研究項(xiàng)目均基于全長轉(zhuǎn)錄組,,通常來說很難承擔(dān),因此,,全長轉(zhuǎn)錄組測序一般與普通轉(zhuǎn)錄組測序相結(jié)合,。貴州外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)