乙?；揎椀鞍捉M學(xué)實(shí)驗(yàn)流程：1）組織/細(xì)胞破碎，提取蛋白質(zhì),；2）蛋白酶解成多肽片段；3）對(duì)多肽片段進(jìn)行 iTRAQ 標(biāo)記,；4）高效特異性乙?；贵w富集乙酰化修飾肽段,；5）使用 LC-MS/MS 對(duì)富集的乙?；亩芜M(jìn)行序列分析；5）數(shù)據(jù)分析,，比對(duì)不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町悾?duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋,。乙?；且粋€(gè)普遍而重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,，不僅集中在對(duì)細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)的影響以及對(duì)核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子方面，而且還影響參與細(xì)胞周期和新陳代謝,、肌動(dòng)蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面,。乙酰化不僅存在于真核細(xì)胞中,，而且越來(lái)越多的證據(jù)也表明乙?；瑯佑绊懺S多原核細(xì)胞的生理生化過(guò)程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加,。四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域

泛素化修飾蛋白組學(xué)研究：泛素化修飾蛋白組學(xué)是一種重要的翻譯后修飾,。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解,。此外,，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期,、細(xì)胞凋亡,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng),。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低,、動(dòng)態(tài)范圍廣，質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度,，然后利用傳統(tǒng)的定量蛋白組分析手段對(duì)富集得到的泛素化肽段樣品進(jìn)行定量分析,。杭州乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)類型質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè),。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)樣品要求：1,、動(dòng)物組織的樣品量濕重不少于200mg。2,、植物細(xì)菌,、噬菌體等微生物類樣品量濕重不少于2g。3,、富含雜質(zhì)或蛋白質(zhì)含量低的樣品量濕重不少于5g,；如植物的根，木質(zhì)部,、韌皮部組織等,。4、體液類（唾液,、羊水,、腦脊液等）10mL以上，要保證不能溶血,；血清要求500μl以上,；尿液要求50mL以上,。5、如直接提供蛋白質(zhì)提取物,，濃度不少于2 mg/mL,，總量不少于1 mg。為保證實(shí)驗(yàn)效果,，請(qǐng)盡量告知緩沖液成分,，如是否有硫脲、SDS,、強(qiáng)離子鹽等等,。另樣品中應(yīng)不含核酸、脂類,、多糖等影響分離效果的成分,。6、在細(xì)胞器蛋白質(zhì)組學(xué)方面,，提取細(xì)胞器或亞細(xì)胞器后,，蛋白沉淀量在1 mg以上。

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過(guò)程的重要方式,，幾乎在每個(gè)細(xì)胞過(guò)程中都是不可或缺的,。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,，這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測(cè),。蛋白質(zhì)是各種細(xì)胞功能比較重要的執(zhí)行者，其功能正常與否決定著生命活動(dòng)能否有序,、高效的進(jìn)行,，而其中翻譯后修飾起著至關(guān)重要的作用。翻譯后修飾改變了蛋白質(zhì)中不同氨基酸殘基上的生物化學(xué)官能團(tuán),，進(jìn)而改變其化學(xué)性質(zhì)或結(jié)構(gòu),，使得蛋白質(zhì)具有更為復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和更為完善的功能，實(shí)現(xiàn)更為精細(xì)的調(diào)節(jié),。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過(guò)程極其復(fù)雜,，已知的翻譯后修飾種類有20多種。但其中較為常見(jiàn)的主要是磷酸化,、泛素化,、SUMO化、酰(含乙酰)化,、甲基化以及糖基化,。在有機(jī)體內(nèi)，磷酸化是蛋白翻譯后修飾中比較普遍的共價(jià)修飾形式,。

泛素化修飾蛋白組學(xué)研究分析樣品要求：1. 如果您提供的是組織樣品,，請(qǐng)您干冰將組織樣品寄給我們,；植物組織樣本大于400mg，血液樣品至少2ml(血漿注意用EDTA防凝),，血清2ml,，尿液10ml，動(dòng)物組織樣品至少2g,，細(xì)胞樣品為1X10^8個(gè)細(xì)胞,，酵母、微生物等干重400mg,。2. 如果您提供的是蛋白樣品,，請(qǐng)您保證蛋白總量在2-5mg；蛋白提取時(shí)使用普通的組織,、細(xì)胞裂解液即可,。3. 樣品運(yùn)輸：請(qǐng)使用足量的干冰運(yùn)輸，并且盡量選用較快的郵遞方式,，以降低運(yùn)輸過(guò)程中樣品降解的可能性,。4. 在正式實(shí)驗(yàn)之前,，我們都會(huì)對(duì)您提供的樣品進(jìn)行檢測(cè),，檢測(cè)合格后開(kāi)始正式試驗(yàn)。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,。浙江蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)領(lǐng)域

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題？四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域

蛋白質(zhì)翻譯后修飾加入的官能團(tuán)反應(yīng)有：1,、乙?；ǔＳ诘鞍踪|(zhì)的N末端加入乙酰。2,、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基,。3、甲基化——烷基化中常見(jiàn)的一種,，在賴氨酸,、精氨酸等的側(cè)鏈氨基上加入甲基。4,、生物素化——用生物素附加物令保存的賴氨酸?；?,、谷氨酸化——在谷氨酸與導(dǎo)管素及其他蛋白質(zhì)之間建立共價(jià)鍵,。6、甘氨酸化——在一個(gè)至超過(guò)40種甘氨酸與導(dǎo)管素的C末端建立共價(jià)鍵,。7,、糖化——將糖基加入天冬酰胺,、羥離氨酸、絲氨酸或蘇氨酸,，形成糖蛋白,。8、異戊二烯化——加入如法呢醇及四異戊二烯等異戊二烯,。9,、硫辛酸化——附著硫辛酸的功能性。四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域