蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,,然后通過高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,通過相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫檢索匹配,,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn),。蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析樣品經(jīng)酶解后,用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集,,富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析,,并通過軟件完成數(shù)據(jù)檢索。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,,特異性高,富集效率好,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾幾乎參與了細(xì)胞所有正常生命活動(dòng)的過程,。浙江蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)有哪些
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過程的重要方式,,幾乎在每個(gè)細(xì)胞過程中都是不可或缺的,。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對其的檢測,。蛋白質(zhì)是各種細(xì)胞功能比較重要的執(zhí)行者,其功能正常與否決定著生命活動(dòng)能否有序,、高效的進(jìn)行,,而其中翻譯后修飾起著至關(guān)重要的作用。翻譯后修飾改變了蛋白質(zhì)中不同氨基酸殘基上的生物化學(xué)官能團(tuán),,進(jìn)而改變其化學(xué)性質(zhì)或結(jié)構(gòu),,使得蛋白質(zhì)具有更為復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和更為完善的功能,實(shí)現(xiàn)更為精細(xì)的調(diào)節(jié),。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過程極其復(fù)雜,,已知的翻譯后修飾種類有20多種,。但其中較為常見的主要是磷酸化、泛素化,、SUMO化,、酰(含乙酰)化、甲基化以及糖基化,。濟(jì)南亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)有什么重要的作用呢,?
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用:泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān),。因此,,作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,它已然成為研究,、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn),。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢:高特異性的修飾抗體,;高分辨率,、高靈敏度質(zhì)譜儀;鑒定通量高,;可與代謝組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析,。
蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué):乙?;揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟?,將乙酰CoA的乙酰基基團(tuán)轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)氨基酸的殘基上,。蛋白質(zhì)乙?;彩且环N可逆的酶促反應(yīng)過程。乙?;D(zhuǎn)移酶可以將乙?;鶊F(tuán)(CH3C=O)從乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)。同理,去乙?;竸t可以逆轉(zhuǎn)這種反應(yīng),。蛋白質(zhì)上的賴氨酸乙酰化是細(xì)胞內(nèi)一種重要的PTMs過程,。不僅發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)組蛋白,、轉(zhuǎn)錄因子等上,在細(xì)胞質(zhì)和線粒體中也存在著諸多蛋白的乙酰化修飾,。在植物研究領(lǐng)域內(nèi),,乙酰化修飾主要參與植物光合作用,、生長發(fā)育,、脅迫響應(yīng)等過程。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,,乙酰化修飾可調(diào)節(jié)人體內(nèi)某種代謝酶,,控制糖尿病,,這一發(fā)現(xiàn)為糖尿病干預(yù)與療理帶來新的希望。磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)是原核生物和真核生物中比較重要的調(diào)控修飾形式,。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量,。技術(shù)優(yōu)勢:1、高特異性的修飾類泛抗體,;2,、高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀,;應(yīng)用領(lǐng)域:泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期,、增殖、細(xì)胞凋亡,、分化,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達(dá),、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),、信號傳遞、損傷修復(fù),、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)的調(diào)控,。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,,作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn),。蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,。濟(jì)南亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定
翻譯后修飾是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過程。浙江蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)有哪些
蛋白質(zhì)的甲基化修飾 :蛋白質(zhì)的甲基化(methylation)是指將甲基酶促轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)的某個(gè)殘基上,,通常是賴氨酸或精氨酸,,也包括組氨酸、半胱氨酸和天冬酰胺等,。蛋白質(zhì)的甲基化是一種普遍的修飾,,在大鼠肝細(xì)胞核的總蛋白提取物中,大約2%的精氨酸殘基是二甲基化的,。蛋白質(zhì)甲基化經(jīng)常與乙?;⒘校?yàn)樗鼈兌际浅R姷谋碛^遺傳修飾,,經(jīng)常發(fā)生在組蛋白上,。不過從化學(xué)反應(yīng)的角度來看,乙?;梢运阕饕环N短鏈脂?;揎棧@里主要討論甲基化方面的問題,。浙江蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)有哪些