單細胞RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學工作流程:單細胞RNA測序等高通量單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)通常從針對不同瘤和組織類型(解離、分選和分離細胞等)量身定制的實驗工作流程開始,,然后產(chǎn)生可以比對的序列,,量化、質(zhì)量控制(QC)過濾和以不同方式標準化,,以實現(xiàn)許多下游計算分析,,例如聚類分析以識別轉(zhuǎn)錄不同的細胞類型和亞群,等位基因分析以識別單核苷酸變異(SNV,,用星號表示)或拷貝數(shù)變體(CNV)、軌跡分析,、剪接檢測或瘤的微環(huán)境(TME)相互作用的推斷中,。單細胞轉(zhuǎn)錄組學數(shù)據(jù)的分析通常因精心設(shè)計的研究設(shè)計而變得復雜,這些設(shè)計可能包括來自患病和未患病個體的樣本,、在不同時間點(例如,,診療前和診療后)收集的同一個人的多個樣本,或來自表現(xiàn)出不同疾病狀態(tài)的不同個體的多個樣本,。這樣的研究設(shè)計可以發(fā)現(xiàn)患者共享的轉(zhuǎn)錄特征,,這些特征可能定義疾病中常見的干擾分子途徑。轉(zhuǎn)錄組學能夠同時鑒定和定量稀有轉(zhuǎn)錄本和正常轉(zhuǎn)錄本,。武漢轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)分析
circRNA轉(zhuǎn)錄組學成環(huán)機制:circRNA環(huán)化方式分為內(nèi)含子環(huán)化和外顯子環(huán)化,。目前主流的成環(huán)機制可歸類為:依賴于剪切體的索尾插接環(huán)化。在mRNA前體上,,通過連續(xù)的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′供體的位點連接到上游的3′受體的位點,,索尾插接形成環(huán)化,然后通過剪切形成circRNA,。順式作用元件促進circRNA形成,。部分circRNA外顯子兩側(cè)的內(nèi)含子中含有反向互補序列,首先在剪切位點上并排形成RNA雙鏈體,,再通過可變剪切形成帶內(nèi)含子和不帶內(nèi)含子兩種不同的circRNA,。或者外顯子內(nèi)部以及兩側(cè)的內(nèi)含子可以競爭進行RNA配對,,然后通過可變剪切形成不同類型的circRNA,。武漢外泌體轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)服務宏轉(zhuǎn)錄組學適用范圍包括人體微生態(tài)、環(huán)境、工業(yè),、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域,。
轉(zhuǎn)錄組學測序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢?轉(zhuǎn)錄組學測序具有以下優(yōu)勢:(1)可以直接測定每個轉(zhuǎn)錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度,,同時不存在傳統(tǒng)微陣列雜交的熒光模擬信號帶來的交叉反應和背景噪音問題,;(2)靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本,;(3)可以對任意物種進行全基因組分析,,無需預先設(shè)計特異性探針,因此無需了解物種基因信息,,能夠直接對任何物種進行轉(zhuǎn)錄組分析,,同時能夠檢測未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本,,并準確地識別可變剪切位點及cSNP,,UTR區(qū)域。(4)檢測范圍廣,,高于6個數(shù)量級的動態(tài)檢測范圍,,能夠同時鑒定和定量稀有轉(zhuǎn)錄本和正常轉(zhuǎn)錄本。
轉(zhuǎn)錄組是干什么用的,,和表達譜有什么區(qū)別,?轉(zhuǎn)錄組,指細胞某一時期所有基因的轉(zhuǎn)錄水平,。轉(zhuǎn)錄組學,,是一門在整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學科。簡而言之,,轉(zhuǎn)錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況,。對RNA的分析。分析應該是分幾個維度的DNA到RNA,,RNA的剪切拼接,,RNA的翻譯。表達譜有兩種,,分別是基因表達譜和蛋白質(zhì)表達譜,。基因表達譜是指細胞中所有基因表達的格局,。通過比較分析基因表達譜,,可從整體水平研究代謝機制,認識基因相互作用的網(wǎng)絡關(guān)系,,發(fā)現(xiàn)重要基因,。轉(zhuǎn)錄組學測序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢?
轉(zhuǎn)錄組學技術(shù):轉(zhuǎn)錄組學(transcriptomics),,是一門在整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學科。簡而言之,,轉(zhuǎn)錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況,。轉(zhuǎn)錄組即一個活細胞所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,是研究細胞表型和功能的一個重要手段,。優(yōu)勢:高通量,、更精確的數(shù)字信號;在單核苷酸水平對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測,;分析轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)和表達水平的同時,,還能發(fā)現(xiàn)未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本;準確地識別可變剪切和融合基因,。應用方向:植物生長機制的發(fā)現(xiàn)及干預,;炎癥發(fā)生機制的發(fā)現(xiàn)及干預;表達差異的研究,;基因點突變及多態(tài)性檢測,。轉(zhuǎn)錄學組測序能夠提供更高的檢測通量。南京靶向轉(zhuǎn)錄組學檢測多少錢
轉(zhuǎn)錄組學測序可以同時測到mRNA,、lncRNA,、micRNA以及circRNA么?武漢轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)分析
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)優(yōu)勢:相比基因芯片和標記的堿基序列的測序方法,,RNA-seq具有一定的優(yōu)越性。與基因芯片相比,,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用來測量基因的表達水平情況,,還可以揭示未知的轉(zhuǎn)錄組和拼接亞型,并為選擇性拼接亞型提供定量分析,。轉(zhuǎn)錄組學(Transcriptomics),,是一門在真整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學科,從RNA水平研究基因的表達情況,。轉(zhuǎn)錄組測序是通過二代測序平臺快速全方面地獲得某一物種特定細胞或組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有的轉(zhuǎn)錄本及基因序列,,可以用來研究基因表達量、基因功能,、結(jié)構(gòu),、可變剪接和預測新的轉(zhuǎn)錄本等等。武漢轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)分析