蛋白質(zhì)組學(xué)植物篇樣品寄樣要求:植物相較于動(dòng)物,蛋白占比不高,,所以送樣在量上面的要求會(huì)多一些,,推薦送500mg以上的量可以確保實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛱崛〉匠渥愕牡鞍住H绻欠N仁、豆類等蛋白含量比較高的,200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質(zhì)沖洗干凈,,去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度,,不推薦用錫紙包裹,,放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好,。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存,送樣時(shí)需要添加干冰,。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在農(nóng)業(yè)生物科研領(lǐng)域的應(yīng)用為作物生長發(fā)育,、病蟲害防治、遺傳育種,、等方面發(fā)揮重要的作用,。浙江PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)組學(xué)介紹:蛋白質(zhì)組學(xué),指對某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模,、系統(tǒng)化地研究,,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動(dòng)的分子網(wǎng)絡(luò)。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征,、蛋白質(zhì)的豐度,、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)的修飾,、亞細(xì)胞定位和三維結(jié)構(gòu),、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)組主要通過蛋白質(zhì)雙向電泳,、氨基酸序列測定、質(zhì)譜,、生物信息等方法,,研究某個(gè)基因組對應(yīng)的所有蛋白質(zhì)特征,包括蛋白質(zhì)含量,、亞細(xì)胞定位,、活性以及蛋白修飾等內(nèi)容。廣東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)檢測價(jià)格蛋白質(zhì)組研究有助于了解蛋白的結(jié)構(gòu),、細(xì)胞的功能,、生命的本質(zhì)及活動(dòng)規(guī)律。
常用的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)方法有以下幾類:非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù):Label free定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強(qiáng)度,,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量,。TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):這種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量,,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。
蛋白質(zhì)組學(xué)與基因組學(xué)的差異:蛋白質(zhì)組和基因組(genome)在概念上有相關(guān)性,,某一個(gè)蛋白質(zhì)組的蛋白質(zhì)是由其基因組所編碼的,,然而蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)在研究對象和研究方法上有很大的區(qū)別,。基因組在所有的細(xì)胞中幾乎都是完整的,,與之不同,,蛋白質(zhì)組具有很高的細(xì)胞和組織特異性,不同的細(xì)胞組織表達(dá)不同的蛋白質(zhì)組,。蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因組,,這是因?yàn)橐粋€(gè)基因≠一個(gè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物≠一個(gè)蛋白質(zhì)。比如據(jù)估計(jì)人的基因組由30000個(gè)基因組成,,經(jīng)mRNA剪切和蛋白質(zhì)翻譯后修飾將產(chǎn)生20萬~200萬個(gè)蛋白質(zhì),。由于不同的轉(zhuǎn)錄起始和mRNA剪切使同一基因產(chǎn)生了不同的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同樣由于不同的翻譯起始,,一個(gè)mRNA可以翻譯成不同的蛋白質(zhì),。蛋白質(zhì)組學(xué)的分析主要指蛋白的生信分析,依賴于數(shù)據(jù)庫的建立,。
蛋白質(zhì)組學(xué)定義:蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics),,指對某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動(dòng)的分子網(wǎng)絡(luò),。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征、蛋白質(zhì)的豐度,、蛋白質(zhì)活性,、蛋白質(zhì)的修飾、亞細(xì)胞定位和三維結(jié)構(gòu),、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu),。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法主要有:蛋白質(zhì)雙向電泳、氨基酸序列測定(包括N端測序和C端測序),、質(zhì)譜,、生物信息學(xué)。iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用比較普遍的技術(shù),。廣州新型修飾蛋白組學(xué)服務(wù)
蛋白質(zhì)組研究是對基因組研究的重要補(bǔ)充,。浙江PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢和局限的特點(diǎn),,而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法,。除了發(fā)展新方法外,更強(qiáng)調(diào)各種方法間的整合和互補(bǔ),,以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同特征,。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要,,這種交叉是新技術(shù)新方法的活水之源,,特別是,,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它大規(guī)模科學(xué)如基因組學(xué),,生物信息學(xué)等領(lǐng)域的交叉,,構(gòu)成組學(xué)(omics)生物技術(shù)研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(xué)(System Biology)研究模式,,將成為未來生命科學(xué)比較令人激動(dòng)的新前沿,。浙江PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)