轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的方法:在早期,由于測(cè)序價(jià)格昂貴,、基因序列數(shù)目有限,,轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究者只能進(jìn)行極少數(shù)特定基因的結(jié)構(gòu)功能分析和表達(dá)研究。近十幾年,,分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展使高通量分析成為可能,,這為真正意義上的轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究奠定了基礎(chǔ)。這些高通量研究方法主要可以分為兩類:一類是基于這類方法包括表達(dá)序列標(biāo)簽技術(shù),、基因表達(dá)系列分析技術(shù),、大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)、RNA測(cè)序技術(shù)其中,,Microarray和EST技術(shù)是較早發(fā)展起來(lái)的先驅(qū)技術(shù),,SAGE、MPSS和RNA-sea是高通量測(cè)序條件下的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究有助于了解特定生命過(guò)程中相關(guān)基因的整體表達(dá)情況,,進(jìn)而從轉(zhuǎn)錄水平初步揭示該生命過(guò)程的代謝網(wǎng)絡(luò)及其調(diào)控機(jī)理,。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于基因點(diǎn)突變及多態(tài)性檢測(cè)。廣東SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法
轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:農(nóng)林領(lǐng)域:生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,,抗逆脅迫機(jī)制,,育種,物種保護(hù)研究等,;畜牧業(yè):生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,,致病機(jī)理研究,肉類及乳制品品質(zhì)研究等;海洋水產(chǎn):生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,,漁業(yè)資源,,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等;微生物:致病機(jī)理,,耐藥機(jī)制,,病原體-宿主相互作用研究等;生物醫(yī)藥:生物標(biāo)志物,,疾病機(jī)理機(jī)制,,疾病分型,藥物開(kāi)發(fā),,個(gè)性化醫(yī)治等,;環(huán)境科學(xué):發(fā)酵過(guò)程優(yōu)化,生物燃料生產(chǎn),,環(huán)境危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究等,;食品科學(xué):食品儲(chǔ)藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質(zhì)鑒定,,功能性食品開(kāi)發(fā),,食品安全監(jiān)檢測(cè)等。濟(jì)南circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用什么是轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序,?
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù):?jiǎn)渭?xì)胞轉(zhuǎn)錄組目前主要有三種方法:SMART擴(kuò)增技術(shù),、10×genomics技術(shù)及Andeplete技術(shù)。SMART擴(kuò)增技術(shù)比較關(guān)鍵的技術(shù),,就是設(shè)計(jì)了2個(gè)特殊的引物,。再配合用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。特殊引物1由中間PolyT序列加上一段通用序列及3’末端兩個(gè)簡(jiǎn)并堿基構(gòu)成,,但在PolyT的3’端倒數(shù)第二個(gè)堿基是A,、C、G而非T的簡(jiǎn)并堿基,,而倒數(shù)第1個(gè)為簡(jiǎn)并堿基,,這樣做的好處是讓它正好結(jié)合在mRNA的3’端連到Poly(A)尾巴的這個(gè)連接處,而不會(huì)結(jié)合到mRNA的別的地方,。這樣就保證了逆轉(zhuǎn)錄的起始位置正好是mRNA的3’端的序列終止位置,。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)(transcriptomics)是功能基因組學(xué)(FunctionalGenomics)研究的重要組成部分,是一門在整體水平上研究細(xì)胞中所有基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科,。隨著人類基因組計(jì)劃HGP(HumanGenomeProject)的完成,科學(xué)家也逐漸認(rèn)識(shí)到對(duì)基因結(jié)構(gòu)序列的研究只是基因組學(xué)研究的一部分,,并不能揭示所有的生命奧秘,,所以接下來(lái)需要解決的問(wèn)題是:研究這些基因序列的功能、參與的生命過(guò)程、表達(dá)調(diào)控方式,,以及這些基因在不同的時(shí)空條件下的表達(dá)差異等,。這些問(wèn)題都需要功能基因組學(xué)技術(shù)來(lái)解決,而轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)是功能基因組學(xué)研究的重要組成部分,。對(duì)基因及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)產(chǎn)物功能研究的功能基因組學(xué),,將為疾病控制和新藥開(kāi)發(fā)、作物和畜禽品種的改良提供新思路,,為人類解決健康問(wèn)題,、食物問(wèn)題、能源問(wèn)題和環(huán)境問(wèn)題提供新方法,。廣義轉(zhuǎn)錄組學(xué)是指生命單元(通常是一種細(xì)胞)中所有按基因信息單元轉(zhuǎn)錄和加工的RNA分子,。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)(Transcriptome)廣義上指某一生理?xiàng)l件下,細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的匯合,,包括信使RNA(mRNA),、核糖體RNA(rRNA)、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA),;狹義上指所有mRNA的匯合,。轉(zhuǎn)錄組具有很強(qiáng)的時(shí)間和空間特性,是基因功能及結(jié)構(gòu)研究的基礎(chǔ)和出發(fā)點(diǎn),,掌握了生物個(gè)體基因轉(zhuǎn)錄水平的變化,,可深入了解其生命活動(dòng)特征和調(diào)控機(jī)制。通過(guò)新一代高通量測(cè)序,,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本的基因序列信息,。circRNA是一種非編碼RNA,可以多種方式參與生物學(xué)功能,。武漢靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析
狹義上轉(zhuǎn)錄組學(xué)的指所有mRNA的組合,。廣東SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序有什么樣的樣品要求?(1)樣品純度要求:OD值應(yīng)在1.8至2.2之間,;電泳檢測(cè)28S:18S至少大于1.8,。(2)樣品濃度:totalRNA濃度不低于400ng/μg。(3)totalRNA樣品請(qǐng)置于-20℃保存,;請(qǐng)?zhí)峁﹖otalRNA樣品具體濃度,、體積、制備時(shí)間,、溶劑名稱及物種來(lái)源,。請(qǐng)同時(shí)附上QC數(shù)據(jù),包括電泳膠圖,、分光光度或Nanodrop儀器檢測(cè)數(shù)據(jù),。(4)樣品請(qǐng)置于1.5ml管中,,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時(shí)間,,管口使用Parafilm封口,。建議使用干冰運(yùn)輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,,以降低運(yùn)輸過(guò)程中樣品降解的可能性,。廣東SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法