蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的研究策略：目前，有幾種分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾的策略,，包括質(zhì)譜（MS）,、Eastern blotting、放射性標(biāo)記和Western blotting,。放射性標(biāo)記和Western blotting是比較傳統(tǒng),、特異性和相對(duì)定量的方法。該過程需要事先知道翻譯后修飾類型,。局限性包括抗體的特異性和可用性,。質(zhì)譜技術(shù)也常被用于翻譯后修飾分析，不受修飾類型和相關(guān)修飾位點(diǎn)的現(xiàn)有知識(shí)的限制,。自下而上：自下而上的技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中使用的質(zhì)譜策略之一,。在根據(jù)序列鑒定肽之前，需要使用蛋白酶消化蛋白質(zhì),。由于該技術(shù)不能保證在檢測過程中被檢測肽的完整性和穩(wěn)定性,，因此無法獲得不同蛋白質(zhì)翻譯后修飾之間關(guān)系的信息，這意味著它無法檢測到某些修飾,。因此,，該方法不適用于分析組蛋白的組合翻譯后修飾,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位。北京棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,？蛋白質(zhì)的翻譯后修飾（）是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾。對(duì)于大部分的蛋白質(zhì)來說,，這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟,。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分。通過向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),，是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟,。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能。這個(gè)過程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄,，并影響表觀遺傳學(xué),。四川蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)研究常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括糖基化。

蛋白翻譯后修飾檢測：由于PTMs在基礎(chǔ)生物學(xué)以及疾病發(fā)病機(jī)理中的重要性,，因此非常需要對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行檢測,。對(duì)蛋白翻譯后修飾進(jìn)行研究時(shí)通常需要富集步驟，因?yàn)檫@些翻譯后修飾的蛋白質(zhì)相對(duì)含量較低,。大多數(shù)PTMs的檢測方法與富集策略結(jié)合在一起開發(fā),，以提供比較好的機(jī)會(huì)來識(shí)別、驗(yàn)證和研究蛋白翻譯后修飾的功能,。但是,，在檢測已有特異性翻譯后修飾抗體的修飾蛋白質(zhì)時(shí)，可能不需要富集步驟,。質(zhì)譜技術(shù),，通過測定肽段的分子量可以對(duì)該肽段的翻譯后修飾情況進(jìn)行檢測，并可以對(duì)翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性和定量分析,。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾類型：根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同,，可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類，即O-磷酸鹽蛋白質(zhì),、N-磷酸鹽蛋白質(zhì),、酰基磷酸鹽蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì),。1,、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過羥氨基酸（如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸）的磷酸化形成,。2,、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成,。3,、 ?；姿猁}蛋白質(zhì)通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4,、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過半胱氨酸磷酸化形成,。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法：免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性,。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法： Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳通過連接在丙烯酰胺分子上的雙核金屬（如Mn2+）配合物對(duì)磷酸基團(tuán)的親和，造成磷酸化蛋白遷移的滯留,，再將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,，用相應(yīng)蛋白的抗體識(shí)別，根據(jù)遷移滯留檢測蛋白磷酸化,。技術(shù)優(yōu)勢特點(diǎn)：1,、無放射危害。2,、鑒定不受限于特異性識(shí)別蛋白質(zhì)磷酸化的抗體,。3、適用于大規(guī)模磷酸化蛋白分析,。4,、與質(zhì)譜鑒定兼容，進(jìn)行更為精細(xì)的分析鑒定,。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價(jià)鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合,。貴州氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式

在眾多乙酰化修飾的蛋白質(zhì)中,，研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了,。北京棕櫚酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)定量分析：1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記，組織/細(xì)胞破碎,，提取,、提純目的蛋白質(zhì)（基于SILAC的乙酰化修飾組學(xué)定量）,。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 對(duì)多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記（基于iTRAQ的乙酰化修飾組學(xué)定量）,。4. 使用高效特異性乙?；贵w對(duì)乙酰化修飾肽段進(jìn)行免疫富集,。5. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?；亩芜M(jìn)行序列分析,。6. 數(shù)據(jù)分析，比對(duì)不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町?，并對(duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。北京棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

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