PRM靶向蛋白組學(xué):PRM技術(shù)是一種根據(jù)已知實(shí)測信息或質(zhì)譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行靶向定量的技術(shù),。該技術(shù)主要應(yīng)用儀器為QExactive系列質(zhì)譜儀,首先以四極桿作為質(zhì)量過濾器,,特異性地選擇與預(yù)先設(shè)定質(zhì)荷比相同的肽段離子(母離子)通過,,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質(zhì)譜信息,。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術(shù)的結(jié)合使得PRM技術(shù)有很高的特異性,,并且有效的降低了背景噪音,,去除了干擾離子,,提高了靈敏度,。在確保數(shù)據(jù)質(zhì)量的前提下,為了在一次分析中檢測更多的蛋白質(zhì),,可用預(yù)置PRM(ScheduledPRM,sPRM)的方法,,這種方法需要知道每個(gè)肽段的保留時(shí)間信息,使得每個(gè)肽段只在其洗脫時(shí)間窗口內(nèi)執(zhí)行PRM檢測,,很大程度上提高了檢測效率,,可同時(shí)檢測上百種蛋白質(zhì)。PRM技術(shù)是目前應(yīng)用較普遍的質(zhì)譜蛋白質(zhì)靶向定量技術(shù),。蛋白質(zhì)組的概念指由一個(gè)基因組,,或一個(gè)細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì),。深圳定量蛋白組學(xué)應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué),,指對某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動(dòng)的分子網(wǎng)絡(luò)。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征,、蛋白質(zhì)的豐度,、蛋白質(zhì)活性,、蛋白質(zhì)的修飾、亞細(xì)胞定位和三維結(jié)構(gòu),、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu),。質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展為這些研究提供了有力的技術(shù)支撐,使得許多有實(shí)際應(yīng)用的蛋白質(zhì)組功能研究成為可能,,包括翻譯后修飾的整體分析,,蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的重建和模式生物蛋白表達(dá)譜的定量研究;在臨床醫(yī)學(xué)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中也越來越多地應(yīng)用到蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),。河南醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個(gè)詞的組合。
蛋白組學(xué)技術(shù):質(zhì)譜技術(shù)相較于傳統(tǒng)蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)而言,,擁有靈敏,、準(zhǔn)確、高通量,、自動(dòng)化等特點(diǎn),。質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)的基本原理是先將樣品分子離子化,然后根據(jù)不同離子之間的質(zhì)荷比差異來分離并確定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量,。根據(jù)蛋白質(zhì)酶解后所得到的肽質(zhì)量指紋圖譜,、肽序列標(biāo)簽、和肽階梯序列去檢索蛋白質(zhì)或核酸序列數(shù)據(jù)庫,,質(zhì)譜技術(shù)可達(dá)到對蛋白質(zhì)的快速鑒定和高通量篩選,。因產(chǎn)生離子的方法不同而發(fā)展起來的質(zhì)譜包括基質(zhì)輔助激光解吸離子化質(zhì)譜、電噴霧離子化質(zhì)譜,、表面增強(qiáng)激光解吸離子化質(zhì)譜等,。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異,。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù),。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,可研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異,。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究主要促進(jìn)分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展,。
蛋白組學(xué)樣本要求:常規(guī)組織:(心、肝,、脾,、肺、腎、腸,、腦,、肌肉等)PBS洗滌去除殘留血液和污染物,剔除無關(guān)的干擾組織(血管,、脂肪,、結(jié)締組織等);沖洗干凈,,用組織剪或手術(shù)刀將組織分離成1cm3左右的小塊,;液氮速凍5min,保存于-80℃,。軟骨組織:PBS洗滌去除殘留血液和污染物,;用手術(shù)刀將軟骨切成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,,保存于-80℃,。軟體動(dòng)物(吸蟲等)PBS洗滌去除來自宿主的污染;液氮速凍5min,,保存于-80℃,。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑,。蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng),,也是一個(gè)整體的概念。江蘇PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程
在當(dāng)前的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中,,蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用,。深圳定量蛋白組學(xué)應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù),。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點(diǎn)進(jìn)行分離,,等電聚焦中,蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個(gè)連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳,。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸,,在電場中形成正極為酸性,負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度,。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點(diǎn)的pH條件下帶有電荷,,因此可以在電場中移動(dòng);當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點(diǎn)位置時(shí),,其靜電荷數(shù)為零,,在電場中不再移動(dòng),據(jù)此將蛋白質(zhì)分離,。深圳定量蛋白組學(xué)應(yīng)用
上海拜譜生物科技有限公司是一家從事生物科技,、醫(yī)療科技、化工科技和檢測科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),技術(shù)轉(zhuǎn)讓,,技術(shù)咨詢,,技術(shù)服務(wù),,軟件開發(fā),,化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品,監(jiān)控化學(xué)品,,煙花爆竹,,民用物,易制毒化學(xué)品),、儀器儀表的銷售,。。,。....的公司,,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實(shí)、誠實(shí)可信的企業(yè),。拜譜生物深耕行業(yè)多年,,始終以客戶的需求為向?qū)В瑸榭蛻籼峁?**的多組學(xué)服務(wù),,質(zhì)譜檢測,,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),。拜譜生物始終以本分踏實(shí)的精神和必勝的信念,,影響并帶動(dòng)團(tuán)隊(duì)取得成功。拜譜生物始終關(guān)注自身,,在風(fēng)云變化的時(shí)代,,對自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使拜譜生物在行業(yè)的從容而自信,。