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濟(jì)南乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式

來源: 發(fā)布時間:2022-01-12

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價修飾方式之一,。磷酸化修飾本身所具有的簡單,、靈活、可逆的特性,,以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性,,使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種比較普遍的調(diào)控手段。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,,幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖,、發(fā)育、分化,、細(xì)胞骨架調(diào)控,、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)活動,、肌肉收縮,、新陳代謝發(fā)生等生命活動的所有過程,并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的比較主要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方式,。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,。濟(jì)南乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)主要方式

翻譯后修飾蛋白組:翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學(xué)水平上對存在翻譯后修飾的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細(xì)胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白,。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程,。蛋白翻譯后修飾通過在一個或多個氨基酸殘基上加修飾基團(tuán)或通過蛋白質(zhì)水解去基團(tuán)而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),,調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能。經(jīng)過翻譯后修飾的蛋白質(zhì)稱為翻譯后修飾蛋白,。目前,,已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化,、乙?;⒎核鼗?、二硫鍵配對、甲基化和亞硝基化等等,。棕櫚?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程。

蛋白質(zhì)乙?;揎楄b定流程:1. 組織/細(xì)胞破碎,,提取、提純目的蛋白質(zhì),。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集,。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進(jìn)行鑒定分析,。5. 數(shù)據(jù)分析,,并對鑒定的乙酰化位點(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測,。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展,,我們越來越深刻地意識到,對于生物體生命活動的管理和調(diào)控過程,,密切相關(guān)的不只是單個蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài),,更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質(zhì),、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的,、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí),借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系,。

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析,。通過質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對于某一個特定肽段而言,,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,,例如磷酸化修飾,,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的,。在質(zhì)譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,,假設(shè)這個肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn),。蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理,、化學(xué)性質(zhì)。

蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)定量分析:1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記,,組織/細(xì)胞破碎,提取,、提純目的蛋白質(zhì)(基于SILAC的乙?;揎椊M學(xué)定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 對多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學(xué)定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M(jìn)行序列分析,。6. 數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時應(yīng)該注意些什么問題,?江蘇氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析價格

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù),。濟(jì)南乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式

蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義,?可以使蛋白質(zhì)具有生物活性,,可以發(fā)揮相應(yīng)的功能。翻譯是蛋白質(zhì)生物合成(基因表達(dá)中的一部分,,基因表達(dá)還包括轉(zhuǎn)錄)過程中的第二步(轉(zhuǎn)錄為第1步),,翻譯是根據(jù)遺傳密碼的中心法則,,將成熟的信使RNA分子(由DNA通過轉(zhuǎn)錄而生成)中“堿基的排列順序”(核苷酸序列)解碼,并生成對應(yīng)的特定氨基酸序列的過程,。但也有許多轉(zhuǎn)錄生成的RNA,,如轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA)、核糖體RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻譯為氨基酸序列,。濟(jì)南乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)主要方式

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