熒光標(biāo)記二抗的選擇普遍,；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比，成本較低,。間接免疫熒光的缺點(diǎn)：由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體,，因此物種交叉反應(yīng)性問題增加,；與直接免疫熒光相比，時(shí)間更長（操作步驟更多）,。間接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn)：通過增加能夠與一抗結(jié)合的二抗數(shù)量進(jìn)行信號放大；與直接免疫熒光相比，通過信號放大提高檢測靈敏度,；熒光標(biāo)記二抗的選擇普遍；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比,，成本較低,。間接免疫熒光的缺點(diǎn)：由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體，因此物種交叉反應(yīng)性問題增加,；與直接免疫熒光相比,，時(shí)間更長（操作步驟更多）。熒光抗體法是利用熒光標(biāo)記的抗體來追蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法,。F4/80免疫

熒光的產(chǎn)生：一此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲存能量（如光能,、化學(xué)能等）而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時(shí),，過剩的能量可以電磁輻射的形式放射（即發(fā)光）,。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光；而一旦停止供能，發(fā)光（熒光）現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失,?？梢砸鸢l(fā)熒光的能量種類很多，由光激發(fā)所引起的熒光稱為致熒光,。由化學(xué)應(yīng)所引起的稱為化學(xué)熒光,，由X線或陰極射線引起的分別稱為X線熒光或陰極射線熒光。熒光免疫技術(shù)一般應(yīng)用致熒光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記,。IBA-1免疫熒光檢查熒光抗體技術(shù)可以用于檢測和定位細(xì)胞或組織中的特定抗原物質(zhì),。

免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)：為了保證熒光染色的正確性，初次試驗(yàn)時(shí)需設(shè)置下述對照,，以排除某些非特異性熒光染色的干擾,。①標(biāo)本自發(fā)熒光對照：標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS,。②特異性對照（抑制試驗(yàn)）：標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體,，再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。③陽性對照：已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體,。如果標(biāo)本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光,，陽性對照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光，則為特異性陽性染色,。一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min,，就有熒光減弱現(xiàn)象，經(jīng)熒光染色的標(biāo)本較好在當(dāng)天觀察,，隨著時(shí)間的延長,，熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸下降。

細(xì)胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的,，他是一種抗原抗體反應(yīng),，好像對我們來說他顯得很遙遠(yuǎn)的樣子，因?yàn)槲覀儾⒉涣私馑茏鍪裁?，通過這種技術(shù)可以讓我們對抗原或抗體的性質(zhì),、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù)。細(xì)胞免疫熒光,，這對很多人來說都是一次聽說這個(gè)東西,，也不知道他對我們會(huì)有什么好處與壞處，科學(xué)研究就是這樣子的,，普通老百姓是不會(huì)明白其中的道理的,，但是這些研究也是確實(shí)的在我們的生活中取得了成果，能夠讓大家過的更加舒適,。免疫熒光技術(shù)通過熒光信號的觀察來確定抗原或抗體的分布和定位,。

免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)：對熒光標(biāo)記的抗體的稀釋,，要保證抗體的蛋白有一定的濃度，一般稀釋度不應(yīng)超過1：20,，抗體濃度過低,，會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生的熒光過弱，影響結(jié)果的觀察,。染色的溫度和時(shí)間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化,，染色時(shí)間可以從10min到數(shù)小時(shí)，一般30min已足夠,。染色溫度多采用室溫（25℃左右）,，高于37℃可加強(qiáng)染色效果,，但對不耐熱的抗原（如流行性乙型腦炎病毒）可采用0-2℃的低溫,，延長染色時(shí)間。低溫染色過夜較37℃30min效果好的多,。熒光抗原法是利用已知的熒光標(biāo)記物來追蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法,。F4/80免疫

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。F4/80免疫

細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：根據(jù)所檢測抗原所在位置來確認(rèn)是否需要加入 Triton 進(jìn)行通透,。若所檢測抗原表位位于膜蛋白的白外段,，則不需要通透；一般 5% BSA 封閉即可達(dá)到效果,；從加熒光二抗起,，后面所有操作步驟盡量避光?？s短在熒光顯微鏡下的觀察時(shí)間,，1~2 h 為宜。染色后盡快熒光顯微鏡下觀察,，若不能可放入 4 ℃ 冰箱避光保存一周,。無/弱染色：烤片溫度過高，推薦 56~60 ℃ 1~2 h,；一抗是否適用固定液和石蠟切片,，使用濃度是否過低，孵育是否時(shí)間過短等,。F4/80免疫

上海睿寶和生物科技有限公司是國內(nèi)一家多年來專注從事病理檢測服務(wù),，免疫組化檢測服務(wù)，分子檢測服務(wù),，全景掃描服務(wù)的老牌企業(yè),。公司位于上海市閔行區(qū)都莊路2350號2幢201室，成立于2018-12-11,。公司的產(chǎn)品營銷網(wǎng)絡(luò)遍布國內(nèi)各大市場,。公司主要經(jīng)營病理檢測服務(wù),，免疫組化檢測服務(wù)，分子檢測服務(wù),，全景掃描服務(wù)等產(chǎn)品,，我們依托高素質(zhì)的技術(shù)人員和銷售隊(duì)伍，本著誠信經(jīng)營,、理解客戶需求為經(jīng)營原則,，公司通過良好的信譽(yù)和周到的售前、售后服務(wù),，贏得用戶的信賴和支持,。公司會(huì)針對不同客戶的要求，不斷研發(fā)和開發(fā)適合市場需求,、客戶需求的產(chǎn)品,。公司產(chǎn)品應(yīng)用領(lǐng)域廣，實(shí)用性強(qiáng),，得到病理檢測服務(wù),，免疫組化檢測服務(wù)，分子檢測服務(wù),，全景掃描服務(wù)客戶支持和信賴,。睿寶和秉承著誠信服務(wù)、產(chǎn)品求新的經(jīng)營原則,，對于員工素質(zhì)有嚴(yán)格的把控和要求,，為病理檢測服務(wù)，免疫組化檢測服務(wù),，分子檢測服務(wù),，全景掃描服務(wù)行業(yè)用戶提供完善的售前和售后服務(wù)。