免疫熒光-實驗步驟：細胞爬片免疫熒光：在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次,每次5min;（圓蓋片：13mm24孔；18mm12孔,；20mm6孔）用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次5min0.5%TritonX-100(PBS配制)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟);PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加3%的BSA（PBS配置）,室溫封閉30min5,吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量用PBS稀釋好的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜,。加熒光二抗:PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中室溫孵育50min。免疫熒光技術(shù)可以用于研究植物病理學(xué)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn),。細胞免疫抗體

免疫熒光間接法測抗體實驗步驟：滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于已知抗原標(biāo)本片,，10min后棄去,，使標(biāo)本片保持一定濕度。滴加以0.01mol/L,，pH7.4的PBS適當(dāng)稀釋的待檢抗體標(biāo)本,，覆蓋已知抗原標(biāo)本片。將玻片置于有蓋搪瓷盒內(nèi),，37℃保溫30min,。取出玻片，置于玻片架上,，先用0.01mol/L,，pH7.4的PBS沖洗1-2次，然后按順序過0.01mol/L,，pH7.4的PBS三缸浸泡,，每缸5min，不時振蕩,。取出玻片,，用濾紙吸去多余水分,，但不使標(biāo)本干燥，滴加一滴一定稀釋度的熒光標(biāo)記的抗人球蛋白抗體,。將玻片平放在有蓋搪瓷盒內(nèi),，37℃保溫30min。重復(fù)操作3,。取出玻片,，用濾紙吸去多余水分，滴加一滴緩沖甘油,，再覆以蓋玻片,。熒光顯微鏡高倍視野下觀察，結(jié)果判定同直接法,。CD3免疫抗體免疫熒光技術(shù)可以用于研究動物模型和藥物篩選,。

細胞和組織樣品處理：準(zhǔn)備熒光標(biāo)記的細胞樣品：為實現(xiàn)較佳的圖像質(zhì)量，首先應(yīng)建立針對目的蛋白和細胞結(jié)構(gòu)的研究,，同時將其他一切背景等排除在圖像之外,。固定和破膜細胞樣品用于標(biāo)記–首先將細胞結(jié)構(gòu)、蛋白和核酸固定,，然后使熒光染料和抗體滲入到細胞內(nèi)部,，標(biāo)記目的靶點。封閉細胞樣品,，防止熒光標(biāo)記物與研究無關(guān)的蛋白非特異性結(jié)合,，較大限度提高信噪比。蛋白封閉液有助于減少非特異染色,?？贵w能夠取代封閉蛋白與其表位形成高親和力結(jié)合，而封閉液可防止樣品中的低親和力結(jié)合,。

熒光抗體技術(shù)：抗原抗體反應(yīng)后,，利用熒光顯微鏡判定結(jié)果的檢測方法。免疫熒光測定：抗原抗體反應(yīng)后,，利用特殊儀器測定熒光強度而推算被測物濃度的檢測方法,。免疫熒光實驗步驟：直接法測抗原：基本原理：將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng),。其優(yōu)點是方法簡便,、特異性高，非特異性熒光染色少,。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體,。此法常用于細菌,、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢,、皮膚活檢的免疫病理檢查。免疫熒光技術(shù)具有高靈敏度和高特異性,，可以檢測非常低濃度的目標(biāo)分子,。

免疫熒光應(yīng)用范圍：其應(yīng)用范圍極其普遍，可以測定內(nèi)分泌,、蛋白質(zhì),、細胞因子、細胞表面抗原,、多肽,、核酸、受體,、神經(jīng)遞質(zhì),、肉瘤標(biāo)志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì),。根據(jù)診斷類別,，又可分為傳染性疾病、內(nèi)分泌,、藥物檢測,、免疫學(xué)、血型鑒定等,。免疫熒光實驗步驟：洗滌：PBS洗滌5min*3次,。封閉：使用封閉液對樣本進行封閉，一般1h,。加一抗：使用合適濃度的一抗與樣本4℃過夜。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次,。加二抗：使用間接法時需要加二抗處理，根據(jù)說明書使用合適的濃度,，避光處理1h（后面步驟均需避光）,。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次,。封片：滴一滴防淬滅劑，封片,。可立即觀察后暫存4℃盡快觀察,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究內(nèi)臟移植和免疫抑制,。HBCAg免疫組化

免疫熒光技術(shù)可以用于研究代謝疾病和內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能,。細胞免疫抗體

通過不同顏色熒光標(biāo)記不同的靶標(biāo),，可以直觀的觀察同一樣品細胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)和蛋白,。熒光標(biāo)記靶標(biāo)的方法主要包括熒光染料,、免疫標(biāo)記,、熒光融合蛋白等——這幾種方法均可選擇性標(biāo)記細胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)和蛋白,，讓您在成像時更輕松地進行觀察,。細胞生物學(xué)采用的很多熒光工具基本上都是熒光基團。這些熒光基團經(jīng)過不同的方法修飾或結(jié)合到不同的分子上,，從而具備了某些的功能與特定的細胞器或蛋白結(jié)合,。通過化學(xué)修飾,，單個熒光基團可以產(chǎn)生許多變體形式,，且每種變體都有不同的特異性。細胞免疫抗體