免疫學的基本反應是抗原-抗體反應,。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發(fā)生反應時,，只要知道其中的一個因素,，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上,，與其相應的抗原（或抗體）結(jié)合后,，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。在此基礎上又分為兩種方法：直接法和間接法,。直接法：將標記的特異性熒光抗體直接加到抗原上,，經(jīng)過一定時間反應，即可結(jié)合并顯色,。間接法：先用抗原的抗體（一抗）與抗原反應結(jié)合,，再用熒光標記的二抗（一抗的抗體）與抗原反應，形成抗體-抗原-抗體復合物,。免疫熒光技術可以用于研究細胞凋亡,、細胞增殖和細胞分化等生物學過程。TLR4免疫熒光檢查

免疫熒光通過抗體與示蹤物質(zhì)結(jié)合,，利用抗原-抗體結(jié)合反應,，進而對抗原所在的細胞或組織進行定性或定量,。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出,，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光，可以看見熒光所在的細胞或組織,，利用定量技術測定含量,，從而可對抗原進行細胞定性和定位分析,。細胞免疫熒光用途：快速直觀顯示所檢測蛋白的細胞定位。材料與儀器：樣品：貼壁細胞,；試劑：4% 組織固定液,，PBS，Triton X-100,，BSA,，熒光二抗，免疫熒光染色二抗稀釋液,，抗熒光猝滅封片液,，0.25% 胰酶；器材：6/12/24 孔板,，細胞爬片（蓋玻片）,，載玻片,，15 ml 離心管。TLR4免疫熒光檢查免疫熒光技術可以用于研究遺傳疾病和基因表達調(diào)控,。

免疫熒光應用范圍：其應用范圍極其普遍,，可以測定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì),、細胞因子,、細胞表面抗原、多肽,、核酸,、受體、神經(jīng)遞質(zhì),、肉瘤標志物,、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。根據(jù)診斷類別,，又可分為傳染性疾病,、內(nèi)分泌、藥物檢測,、免疫學,、血型鑒定等。免疫熒光實驗步驟：洗滌：PBS洗滌5min*3次,。封閉：使用封閉液對樣本進行封閉,，一般1h。加一抗：使用合適濃度的一抗與樣本4℃過夜,。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次,。加二抗：使用間接法時需要加二抗處理，根據(jù)說明書使用合適的濃度,，避光處理1h（后面步驟均需避光）,。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次。封片：滴一滴防淬滅劑,，封片,。可立即觀察后暫存4℃盡快觀察,。

細胞免疫熒光步驟是什么呢,？步驟：1. 細胞一定要貼在玻片上（較好可以放入24孔板），為后面照像打基礎,。細胞密度適中,，大約60-75%滿片即可，否則容易脫片,。2. 取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3. PBS沖洗；4. 0.1%Triton作用20分鐘,；5. PBS沖洗；6. 10%正常血清封閉10分鐘,；7. 加入一抗,，4度孵育過夜（找個小瓶蓋將小玻片支起來，抗體就不容易溢出）,，還要記住“砸片”,，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻,?？贵w稀釋度1：60，較常用,！8. PBS沖洗4次,，各5分鐘；9加入熒光二抗,，室溫30分鐘,。抗體稀釋度1：400,，較常用,！10. 90%甘油封片。也很關鍵阿,，多封幾次才有體會,。12. 避光保存，或到顯微鏡下觀察,。免疫熒光技術是基于免疫學,、生物化學和顯微鏡技術的重要方法之一。

免疫熒光的原理：免疫學的基本反應是抗原-抗體反應,。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,，所以當抗原抗體發(fā)生反應時，只要知道其中的一個因素,，就可以查出另一個因素,。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結(jié)合后,，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應,。直接法:將標記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標本上,，經(jīng)一定的溫度和時間的染色,，用水洗去未參加反應的多余熒光抗體,，室溫下干燥后封片、鏡檢,。免疫熒光技術在免疫學研究中發(fā)揮重要作用,，幫助揭示細胞和分子的功能和相互關系。TLR4免疫熒光檢查

免疫熒光技術是一種以熒光素標記抗體來定位抗原物質(zhì)的高度發(fā)達的標記免疫技術,。TLR4免疫熒光檢查

免疫熒光實驗的注意事項：為了保證熒光染色的正確性,，初次試驗時需設置下述對照，以排除某些非特異性熒光染色的干擾,。①標本自發(fā)熒光對照：標本加1-2滴0.01mol/L,，pH7.4的PBS。②特異性對照（抑制試驗）：標本加未標記的特異性抗體,，再加熒光標記的特異性抗體,。③陽性對照：已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。如果標本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光,，陽性對照和待檢標本呈強熒光,，則為特異性陽性染色。一般標本在高壓汞燈下照射超過3min,，就有熒光減弱現(xiàn)象,，經(jīng)熒光染色的標本較好在當天觀察，隨著時間的延長,，熒光強度會逐漸下降,。TLR4免疫熒光檢查