通過不同顏色熒光標(biāo)記不同的靶標(biāo),，可以直觀的觀察同一樣品細(xì)胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)和蛋白,。熒光標(biāo)記靶標(biāo)的方法主要包括熒光染料、免疫標(biāo)記,、熒光融合蛋白等——這幾種方法均可選擇性標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)和蛋白,，讓您在成像時(shí)更輕松地進(jìn)行觀察。細(xì)胞生物學(xué)采用的很多熒光工具基本上都是熒光基團(tuán),。這些熒光基團(tuán)經(jīng)過不同的方法修飾或結(jié)合到不同的分子上,，從而具備了某些的功能與特定的細(xì)胞器或蛋白結(jié)合。通過化學(xué)修飾,，單個(gè)熒光基團(tuán)可以產(chǎn)生許多變體形式,，且每種變體都有不同的特異性。免疫熒光技術(shù)可以用于研究肉瘤的發(fā)生和發(fā)展過程,。HBSAg免疫

基于熒光成像的技術(shù)對(duì)于查詢細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用,。當(dāng)與免疫化學(xué)結(jié)合時(shí)，熒光成像技術(shù)的分析能力增加，增強(qiáng)了這種技術(shù)在普遍的研究和臨床應(yīng)用中的實(shí)用性,，使其成為寶貴的工具,。免疫熒光顯微鏡通過使活細(xì)胞成像能夠可視化整個(gè)細(xì)胞器，徹底改變了細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域,。免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)是結(jié)合抗原抗體結(jié)合能力進(jìn)行細(xì)胞分析的常用熒光成像技術(shù),。免疫熒光（IF）是一種強(qiáng)大的免疫染色技術(shù)，利用顯微鏡觀察與靶蛋白和其他目標(biāo)分子結(jié)合的熒光素標(biāo)記抗體,。免疫熒光用于鑒定細(xì)胞中的細(xì)胞和組織特異性抗原,；可視化蛋白質(zhì)的存在與否、細(xì)胞定位和活化狀態(tài),；并分析免疫反應(yīng),。GFP免疫檢測(cè)免疫熒光技術(shù)可以用于研究食品安全和生物安全。

免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)：為了保證熒光染色的正確性,，初次試驗(yàn)時(shí)需設(shè)置下述對(duì)照,，以排除某些非特異性熒光染色的干擾。①標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照：標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L,，pH7.4的PBS,。②特異性對(duì)照（抑制試驗(yàn)）：標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體，再加熒光標(biāo)記的特異性抗體,。③陽性對(duì)照：已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體,。如果標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照和特異性對(duì)照呈無熒光或弱熒光，陽性對(duì)照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光,，則為特異性陽性染色,。一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現(xiàn)象,，經(jīng)熒光染色的標(biāo)本較好在當(dāng)天觀察,，隨著時(shí)間的延長，熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸下降,。

細(xì)胞免疫熒光可以觀察蛋白在細(xì)胞中的定位,，以及一些特殊信號(hào)分子蛋白的出核/入核的定位變化。在進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光過程中,，需要用到細(xì)胞爬片,，通過將爬片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在爬片上生長,，進(jìn)而進(jìn)行細(xì)胞的免疫熒光,。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：1.胰酶;2.DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基;3.細(xì)胞培養(yǎng)12孔板或者6孔板;4.爬片。間接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn)：通過增加能夠與一抗結(jié)合的二抗數(shù)量進(jìn)行信號(hào)放大,；與直接免疫熒光相比,，通過信號(hào)放大提高檢測(cè)靈敏度,。免疫熒光技術(shù)是一種以熒光素標(biāo)記抗體來定位抗原物質(zhì)的高度發(fā)達(dá)的標(biāo)記免疫技術(shù)。免疫熒光技術(shù)可以通過熒光信號(hào)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原或半抗原物質(zhì),。

細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),，細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后,，采用熒光標(biāo)記,，標(biāo)記完成后，顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少,，從而做出一個(gè)定位研究,，也可以為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)提供一個(gè)明確的指導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng),、特異性高,、速度快的特點(diǎn)，是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù),，也是比較精確的,。免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來顯示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗結(jié)合,，其次是帶有熒光基團(tuán)的二抗識(shí)別并結(jié)合一抗,，熒光顯微鏡下即可觀察到熒光。免疫熒光技術(shù)是將抗體與熒光素等示蹤物質(zhì)結(jié)合,，通過抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行定位,。Aggrecan免疫抗體

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。HBSAg免疫

免疫熒光的制作：樣品準(zhǔn)備（貼壁細(xì)胞,、懸浮細(xì)胞以及組織等）：對(duì)于貼壁細(xì)胞：先將潔凈的蓋玻片在70%乙醇中進(jìn)行浸泡處理，然后用干凈無菌的鑷子放置到培養(yǎng)皿中,，用無菌PBS洗去殘留的乙醇,。待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片，操作小心,，防止細(xì)胞脫片,。對(duì)于懸浮細(xì)胞：有2種方法，①先在懸浮液中進(jìn)行固定步驟,，然后把細(xì)胞滴加在載玻片上,，干燥后細(xì)胞會(huì)緊貼在載玻片上。②先在懸浮液中進(jìn)行固定和染色步驟,，離心洗脫,，然后用移液管移至盒式玻片進(jìn)行后續(xù)染色步驟。對(duì)于冷凍切片：切片放置在載玻片上后,，可以直接進(jìn)行固定等后續(xù)操作,。對(duì)于石蠟切片：免疫熒光中石蠟切片較少,，要先進(jìn)行脫蠟和抗原修復(fù)處理。HBSAg免疫