總RNA提取試劑盒

Trizol是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,，顏色鮮明,，便于分層。本試劑適用范圍較大,，可以從動(dòng)物單位,、 植物材料、 各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA,。 該方法對(duì)少量的單位(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的單位(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果,。樣品在Trizol中被充分裂解的同時(shí)能夠比較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,，溶液會(huì)分成三層：上層無色水相,、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA 分布在上清層中,。收集上清層后,，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,，無蛋白和DNA污染,，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR,、Real-time RT-PCR,、Northern blot、Dot Blot,、體外翻譯等,。

Trizol 試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,，可見許多介于7kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S),，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S),。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。(注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,，28S的位置大約在2kb,，18S大約在1kb的位置,，不同濃度的凝膠位置變化較大。)

牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的.南通capricorn血清 封閉

解凍血清時(shí),，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。解凍血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生請(qǐng)勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁,，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過高,，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多,。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。上海雞血清公司提供各種生長因子,，如胰島素,、氫化可的松、雌二醇,、睪酮,、孕酮.

何謂熱滅活

一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清,，因?yàn)榇思訜岵襟E,，可以使補(bǔ)體去活化,，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮,，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞的趨化,。

有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)的增多,，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點(diǎn)",，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。

購買的時(shí)候注意詢問廠家是否是已滅***清。

T細(xì)胞增殖試驗(yàn)類型  (1) 形態(tài)法：其原則是將外周血液或分離的單個(gè)細(xì)胞與適量的植物血凝素(PHA)混合,，置37℃培養(yǎng)72h,，取培養(yǎng)細(xì)胞作涂片染色鏡檢。據(jù)細(xì)胞的大小,、核與胞漿的比例,、胞漿的染色性和核結(jié)構(gòu)以及有無核仁等特征，分別計(jì)數(shù)淋巴母細(xì)胞,、過渡性母細(xì)胞和核有絲分裂相以及成熟的小淋巴細(xì)胞,，以**者為轉(zhuǎn)化細(xì)胞，每份標(biāo)本計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,，計(jì)算轉(zhuǎn)化率,。   (2) 核素法：絕大多數(shù)外周血T細(xì)胞通產(chǎn)處于細(xì)胞周期的G0期，受特異性抗原或促有絲分裂原后,，從G0期進(jìn)入G1期,，開始合成蛋白質(zhì)、RNA和DNA前體物質(zhì)等,，為DNA復(fù)制準(zhǔn)備物質(zhì)基礎(chǔ),，然后進(jìn)入S期,，細(xì)胞合成DNA量倍增，此時(shí)若在培養(yǎng)液中加入3H標(biāo)記的TdR,，后者摻入新合成的DNA中,，據(jù)摻入的多少推測細(xì)胞增殖程度。血清還含有一些微量元素和離子,，它們在代謝穩(wěn)定中起重要作用,。

血清主要作用

●提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素,、無機(jī)物,、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì),。

●提供和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)（氫化可的松）,、類固醇（雌二醇,、睪酮、孕酮）等,。生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子,、表皮生長因子、血小板生長因子等,。

●提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì),，如白蛋白攜帶維生素、脂肪,、以及等,，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用,。

●提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷,。

●對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞,、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分,，起到中和作用,。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用,。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被用于貼壁細(xì)胞的消化傳代,。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí),，粘度起到重要作用,。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝中起重要作用,，如SeO3,硒等 如需購買血清,，歡迎咨詢上海儒安。上海胎牛血清公司

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無血清快速細(xì)胞凍存液產(chǎn)品簡介：  無血清快速細(xì)胞凍存液,，是一種新型開發(fā)的快速凍存細(xì)胞的保護(hù)液，不含動(dòng)物來源的血清成分,，能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,，減少各類霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞安全,。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,，也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。  產(chǎn)品特色：  1.即用型細(xì)胞凍存液  2.無動(dòng)物來源血清成分,，化學(xué)成分明確,。  3.快速冷凍，可直接置于-80℃冰箱冷凍,，長期保存,，不需要程序性降溫。  4.細(xì)胞存活率和活力高,，批次性差異小,。南通capricorn血清 封閉