總RNA提取試劑盒

Trizol是廣譜型總RNA提取試劑,。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,，顏色鮮明，便于分層,。本試劑適用范圍較大,，可以從動(dòng)物單位,、 植物材料、 各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA,。 該方法對(duì)少量的單位(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的單位(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果,。樣品在Trizol中被充分裂解的同時(shí)能夠比較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,，溶液會(huì)分成三層：上層無色水相,、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA 分布在上清層中,。收集上清層后,，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,，無蛋白和DNA污染,，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR,、Real-time RT-PCR,、Northern blot、Dot Blot,、體外翻譯等,。

Trizol 試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,，可見許多介于7kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),，兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S),，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8,。(注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置,，不同濃度的凝膠位置變化較大,。)

使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被很廣的用于貼壁細(xì)胞的消化傳代,；西安優(yōu)等胎牛血清供應(yīng)

t細(xì)胞增殖試驗(yàn)又稱T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn),。T細(xì)胞在體外經(jīng)某種物質(zhì)刺激，細(xì)胞代謝和形態(tài)相繼變化,，在24~48h細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的合成增加,，產(chǎn)生一系列增殖的變化，如細(xì)胞變化,、細(xì)胞漿擴(kuò)大,、出現(xiàn)空泡,、核仁明顯、核染色質(zhì)疏松等,，由淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨湍讣?xì)胞,。因此，這種淋巴細(xì)胞增殖又叫淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化,。據(jù)此可判斷出淋巴細(xì)胞對(duì)有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài),。  (1)非抗原性刺激物：如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA),、美洲商陸(PWM),、脂多糖(LPS)，通稱促有絲分裂原,。其中LPS刺激B細(xì)胞,，PWM可刺激T和B細(xì)胞，PHA和ConA刺激T細(xì)胞增殖,。  (2)抗原性刺激物：如結(jié)核菌素,、葡萄球菌*、破傷風(fēng)類,、鏈球菌激酶,、抗原、同種異型抗原等,。蘇州雞血清供應(yīng)無血清快速細(xì)胞凍存液使用方法?

血清提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸,、維生素、無機(jī)物,、脂類物質(zhì),、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì).

●提供***和各種生長(zhǎng)因子：胰島素,、腎上腺皮質(zhì)***（氫化可的松,、）、類固醇***（雌二醇,、睪酮,、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子,、表皮生長(zhǎng)因子,、血小板生長(zhǎng)因子等.

●提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素,、脂肪,、以及***等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用,。

●提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷.

避免產(chǎn)生沉淀物1,、解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃,，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。2,、解凍血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生3,、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,，血清會(huì)變得混濁,，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量,。4,、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要,，可以無須做此步驟,。5、若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過高,，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多,。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。常期存放請(qǐng)將血清保存在-5℃至-2O℃冰箱中凍存,有效期5年,。

血清的保存應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：

（1）需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月.由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽?

（2）熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物***增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用,平滑肌細(xì)胞收縮,肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化. 關(guān)于無血清細(xì)胞凍存液的操作規(guī)范是什么?重慶山羊血清進(jìn)口

白蛋白攜帶維生素,、脂肪等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵,，在細(xì)胞代謝過程中起重要作用,；西安優(yōu)等胎牛血清供應(yīng)

血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.

（4）一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清.

（5）血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會(huì)***增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染.一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清. 西安優(yōu)等胎牛血清供應(yīng)