血清的保存應(yīng)該注意以下幾點(diǎn):(1)需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月.由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽?(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物較好增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用,平滑肌細(xì)胞收縮,肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺,增強(qiáng)吞噬作用,促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化.(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.血清能夠維持培養(yǎng)基的pH 值,起酸堿緩沖液作用,;浙江capricorn血清
細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,,細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物,,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體,。多細(xì)胞生物,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞,,用來(lái)補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞,。
多細(xì)胞生物可以由一個(gè)受精卵,,經(jīng)過(guò)細(xì)胞的分裂和分化,,較終發(fā)育成一個(gè)新的多細(xì)胞個(gè)體。必須強(qiáng)調(diào)指出,,通過(guò)細(xì)胞分裂,,可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì),平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去,??梢?jiàn),細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng),、發(fā)育,、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。
細(xì)胞增殖的研究方法有很多,,主要包括:BrdU,,EdU,CCK8等方法,。其中EdU檢測(cè)方法是***的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法,。
EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替T滲入正在復(fù)制的DNA分子,,通過(guò)基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性,,通過(guò)檢測(cè)EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。與BrdU檢測(cè)方法相比,,EdU檢測(cè)方法更快速,、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測(cè)染料只有BrdU抗體大小的1/500,,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,,無(wú)需DNA變性(酸解、熱解,、酶解等)即可有效檢測(cè),,可有效避免樣品損傷,在細(xì)胞和**水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象,。
hyclone血清公司南美特級(jí)胎牛血適合細(xì)胞株的保藏及組織***培養(yǎng),、單抗研制、絕大多數(shù)**細(xì)胞.
血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.
(4)一般廠商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾,切勿直接過(guò)濾血清.
(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)***增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染.一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清.
細(xì)胞增殖周期
細(xì)胞各組成部份在不斷發(fā)展變化的基礎(chǔ)上還要不斷增殖,,產(chǎn)生新細(xì)胞,,以代替衰老、死亡和創(chuàng)傷所損失的細(xì)胞,,這是機(jī)體新陳代謝的表現(xiàn),,也是機(jī)體不斷生長(zhǎng)發(fā)育、賴以生存和延續(xù)種族的基礎(chǔ),。
細(xì)胞各組成部份在不斷發(fā)展變化的基礎(chǔ)上還要不斷增殖,,產(chǎn)生新細(xì)胞,以代替衰老,、死亡和創(chuàng)傷所損失的細(xì)胞,,這是機(jī)體新陳代謝的表現(xiàn),也是機(jī)體不斷生長(zhǎng)發(fā)育,、賴以生存和延續(xù)種族的基礎(chǔ),。細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖,每次分裂后所產(chǎn)生的新細(xì)胞必須經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)增大,,才能再分裂?,F(xiàn)在把細(xì)胞增殖必須經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)到分裂的過(guò)程稱為細(xì)胞周期。換句話說(shuō),,細(xì)胞增殖周期(或細(xì)胞周期)是指細(xì)胞從一次分裂結(jié)束開(kāi)始生長(zhǎng),,到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過(guò)程。細(xì)胞增殖周期可分為兩個(gè)時(shí)期,,即間期和分裂期,。
血清中的氫化可的松,如細(xì)胞密度高時(shí)可能有壓抑細(xì)胞的作用和誘導(dǎo)其發(fā)生分化,。
抗體稀釋參考
一抗稀釋范圍為1mg/mL原液1:1000-1:5000或0.2-1.0μg/mL,,二抗稀釋范圍為1mg/mL原液1:2000-1:10000或10-50ng/mL
注意事項(xiàng)
為獲得比較好效果,在孵育步驟請(qǐng)使用搖床;
2. 將Tween20(終濃度0.05-0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號(hào);
3. 不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑,疊氨鈉是HRP的***物;
4. 避免手與膜直接接觸,實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)戴手套或使用干凈的鑷子;
5. 所有設(shè)備必須清潔且不沾染外來(lái)物質(zhì),金屬器械(如剪刀)不得具有可見(jiàn)的銹跡,銹跡可能導(dǎo)致斑點(diǎn)形成和高背景。 應(yīng)用氨基酸自動(dòng)分析儀,,對(duì)22例食管*病人血清,,正常食管組織和食管*組織游離氨基酸含量分析。北京**igg血清公司
內(nèi)***含量低;(內(nèi)***:≤3EU/ml).浙江capricorn血清
血清定義指纖維蛋白原已被除去的血漿用法肌肉或靜脈注射外文名Serum作用提供和各種生長(zhǎng)因子等形態(tài)淡黃色透明液體
血清的成份可能有幾百種之多,,對(duì)其準(zhǔn)確的成份,、含量及其作用機(jī)制仍不清楚,尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子,、和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí),,這給研究工作帶來(lái)許多困難;
第二:血清都是批量生產(chǎn),,各批量之間差異很大,,而且血清保存期至多一年,因此,,要保證每批血清的相似性極為困難,,從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制;
第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì),,這被認(rèn)為是“瓶中惡化”的原因之一,。
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