CCK8,，即Cell Counting Kit-8,，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),。2、MTT法：其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中,，而死細胞無此功能,。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值,，可間接反映活細胞數(shù)量,。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比,。***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,，經(jīng)常會用到CCK-8。湖北cck8細胞
培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實驗誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收,，但不影響測定,，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照,。另外，血清不影響測定,。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時,，多加了這個***劑的濃度，江蘇cck8增殖曲線CCK8試驗的總體實驗心得.
細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定,，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項,。MTT實驗操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細胞，設(shè)置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）,、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實驗組中,，每孔加入細胞懸液100ul
CCK-8的用途1.細胞增殖測定：細胞增殖實驗在很多領(lǐng)域都會用到,，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等,。2.***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,，經(jīng)常會用到CCK-8。3.細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響,，比如在UV,、低氧或者什么化學(xué)物品對細胞的影響上。4.**藥敏試驗：這個是用的比較廣的,，我見過做**的團隊,，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,，比如果子老師所在的團隊,，哈哈哈。5.微生物對細胞的毒性或增殖的實驗細胞增殖檢測——CCK8.
貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了,，這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全,，而且這樣設(shè)置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧,。3、加藥后的孵育時間,，我的實驗摸了3個時間,，24h，48h,，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間,。太長了就沒有必要了,，細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了,。4、CCK8試劑加入量,，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻報道不一致,。本人**終采用的是后者,。CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.北京cck8凱基
加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎,？湖北cck8細胞
培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實驗誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會增加空白吸收,，但不影響測定，扣除空白吸收即可,，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照。另外,，血清不影響測定,，所以我用CCK-8來測定病毒對細胞活性的影響或者某個***對病毒復(fù)制的影響時，我都小心翼翼的測很多個時間點,，說實話,，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅,。湖北cck8細胞