原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖,。因此,，它們的形態(tài)學和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系,，它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染,。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后，原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系,。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命（即它們是有限細胞系）,，且隨著傳代的進行，具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據(jù)支配地位,，從而造成了細胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形,。相對來說，這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,，尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代,。 pei轉(zhuǎn)染試劑說明書主要內(nèi)容是什么?上海體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑價格

簡介：X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉(zhuǎn)染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細胞系,。優(yōu)勢：1.簡單易用的多組分混合試劑,，無動物源性成分，室溫穩(wěn)定,。2.高轉(zhuǎn)染效率,，對于原代細胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細胞毒性低的試劑,，結(jié)果相關性好,。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1,。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細胞,。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENEHP，導致存活細胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡)...上海polviet轉(zhuǎn)染試劑梯度轉(zhuǎn)染的細胞類型可簡單分為兩大類,，連續(xù)細胞系和原代細胞.

對 HepG2 細胞轉(zhuǎn)染效率的比較

右圖：使用以上轉(zhuǎn)染試劑將 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟轉(zhuǎn)染到 HepG2 細胞（在膠原預處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)）,。在轉(zhuǎn)染 48 小時之后，用流式細胞儀檢測 GFP 陽性細胞（%）和熒光強度,。

左圖：血清和***存在的條件下能提高 LipoD293 試劑（升級版）對在 HepG2 細胞的轉(zhuǎn)染效率,。通過三種不同的條件下轉(zhuǎn)染 HepG2 細胞（生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上）---無血清和***，10% 血清和***的存在,，轉(zhuǎn)染 5 小時后換液和不換液,。

在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。2.高靈活應用,，同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實驗,。3.細胞毒性低，結(jié)果相關性好,，確保所觀察到的細胞效應是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過程本身介導,。4.兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基),。圖4.X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗,。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程，或標準實驗方法,，將100nMHPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細胞,。通過LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評估基因沉默效率。結(jié)果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異,。RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進,、高效的siRNA輸送解決方案。

在選擇轉(zhuǎn)染方法時,，需考慮您希望輸送的運載物（DNA,、RNA或蛋白質(zhì)）以及您希望轉(zhuǎn)染的細胞類型,。您可通過下表選擇各類陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑和Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。

我們提供了各種DNA,、siRNA,、寡核苷酸和RNA輸送選擇，讓您可以對自己的結(jié)果更加自信.***的輸送效果—可轉(zhuǎn)染多種類型的細胞無毒性作用—您之所以能看到結(jié)果,，是因為核酸存在,，而不是因為試劑需要的優(yōu)化工作更少—針對大多數(shù)細胞類型提供了快速、簡便的實驗方案

連續(xù)細胞系 具有無限增殖的潛能,，通常要比原代或有限細胞更易處理,。但由于此類細胞經(jīng)歷過基因改變而變得具有無限增殖能力，它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內(nèi)狀態(tài),。

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轉(zhuǎn)染后6h觀察細胞狀態(tài),，并更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細胞,，用PBS洗滌3次以上,，以備RNA抽提。上海體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑價格

圖5.Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射后可在肝臟中引起劑量反應的敲低現(xiàn)象,。Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的劑量進行注射,。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平（Biophen顯色檢測）。持續(xù)敲低能力在單次注射后可觀察到更長的敲低時間圖6.使用三種不同濃度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究劑量效應,。siRNA分子與Invivofectamine3.0試劑形成復合物后分別以1,、0.5、及0.25mg/kg的劑量進行注射,。在第2、5,、9,、16、23及30日收集血清,，并使用顯色法對血清進行分析以確定FVII蛋白的敲低效果,。低毒性上海體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑價格