細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng),、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段,。在細(xì)胞建株和建系中,，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,，雜交瘤細(xì)胞,、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,，細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，如果沒有原始細(xì)胞的凍存,，則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄“細(xì)胞凍存液的細(xì)胞存活率和活力高,，批次性差異小.江蘇hela細(xì)胞凍存液配比

3、取待凍存的細(xì)胞用胰蛋白酶消化（方法見細(xì)胞的傳代部分）,。用含血清的培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來,，將細(xì)胞懸液吸到無菌離心管中，800r/min離心5min,，棄上清,，收集細(xì)胞沉淀。如果是懸浮生長的細(xì)胞,，則可直接離心收集細(xì)胞,。4、在沉淀中加入適量凍存液制成細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度宜大,，300萬/mL左右,，一般一個(gè)中方瓶中的細(xì)胞濃縮至1mL,，凍存液中為宜。5,、細(xì)胞懸液裝入凍存管中,。用封口膜封裹瓶口，做好標(biāo)記,。6,、凍存管在4℃下存放30min,，轉(zhuǎn)放-20℃中30min，再轉(zhuǎn)入-70℃過夜,，之后即可放入液氮中長久保存,，注意進(jìn)行登記。足細(xì)胞凍存液一般加多少在細(xì)胞建株和建系中,，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的,。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買,、寄贈、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細(xì)胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。理論上儲存時(shí)間是無限的。細(xì)胞凍存液配方是什么?

根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)皿的大小加入適量細(xì)胞培養(yǎng)基后進(jìn)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng),。保存條件：4℃保存,，有效期一年。若長不用可凍存于-20℃,，有效期三年,。產(chǎn)品質(zhì)量：無血清細(xì)胞凍存液經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)，滲透壓,，pH檢測,，并經(jīng)過0.1um濾膜過濾，確保產(chǎn)品不含有細(xì)菌,，支原體等污染,。注意事項(xiàng)：1.請選擇對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行凍存，由于DMSO對細(xì)胞有一定的損傷,，凍存細(xì)胞分裝后應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱,，減少在室溫存放時(shí)間。如遇特殊情況,，可先短暫放置于4℃并盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱,。產(chǎn)品特色:即用型細(xì)胞凍存液.上海無血清細(xì)胞凍存液一般加多少

細(xì)胞凍存液具體有哪些?江蘇hela細(xì)胞凍存液配比

細(xì)胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；2.取對數(shù)生長期的細(xì)胞,，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗,。3.去除PBS,，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；4.離心1000rpm,，5min,；5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml,；6.將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,，凍存時(shí)間及操作者,；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),，可增至-5℃～-10℃/min,；到-100℃時(shí),，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi),。江蘇hela細(xì)胞凍存液配比