總RNA提取試劑盒

Trizol是廣譜型總RNA提取試劑,。實驗操作快速方便,，顏色鮮明，便于分層,。本試劑適用范圍較大,，可以從動物單位、 植物材料,、 各種微生物及培養(yǎng)細胞等樣品中提取總RNA,。 該方法對少量的單位(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的單位(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在Trizol中被充分裂解的同時能夠比較大限度地保證RNA的完整性,。在加入氯仿離心后,，溶液會分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機相,，RNA 分布在上清層中。收集上清層后,，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA,。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染,，可用于各種分子生物學常規(guī)實驗,，如RT-PCR、Real-time RT-PCR,、Northern blot,、Dot Blot,、體外翻譯等。

Trizol 試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出,。例如,，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),，兩條優(yōu)勢核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S),，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8,。(注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置,，不同濃度的凝膠位置變化較大,。)

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避免產(chǎn)生沉淀物1、解凍血清時,，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。2,、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生3、請勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量,。4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無須做此步驟。5,、若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃，30分鐘的原則,，并且隨時搖晃均勻,。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻,，都會造成沉淀物的增多,。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心,，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因為它可能會阻塞過濾膜,。上海血清進口有一些細胞，如內(nèi)皮細胞,、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用,。

保存方法血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,。然而，若存放于4℃時,，請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將血清從冷凍箱取出后,，先置于2-8℃冰箱使之溶解,，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻,。注意事項（1）一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清.（2）血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理.顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會較好增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清.（3）切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質(zhì)量.

血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知,，但還有一部分尚不清楚,，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡,、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異,。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度,、滲透壓等作用,。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白、α1,、α2,、β,、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等,。血清中含有各種血漿蛋白,、多肽、脂肪,、碳水化合物,、生長因子、***,、無機物等,，這些物質(zhì)對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展,，但仍存在一些問題,。能夠維持培養(yǎng)基的pH 值，起酸堿緩沖液作用,；

血清的鑒別方法

血清

血液凝固析出的淡黃色透明液體,。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中,，不加抗凝劑,，則凝血反應(yīng)被，血液迅速凝固,，形成膠凍,。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,，也可于凝血后經(jīng)離心取得,。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,，所以血清中無纖維蛋白原,，這一點是與血漿比較大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中,，血小板釋放出許多物質(zhì),，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,，如凝血酶原變成凝血酶,，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處,。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同,。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析,，都以血清為樣品,。血漿血漿是血液的液體成分，血細胞懸濁于其中,。人體含有2750-3300毫升血漿,，約占血液總體積的55%,。血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白,，還包括葡萄糖,、無機鹽離子以及二氧化碳。血漿的主要功能是運載血細胞,，同時也是運輸分泌產(chǎn)物的主要媒介,。

將新鮮血液離心，使血細胞沉降,，上層淡黃色清液即是血漿,。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。 方法采用血清學和染色體DNA脈沖場凝膠電泳圖譜分析,。浙江進口胎牛血清進口

牛血清中含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,，具有極為重要的功能。杭州豬 血清培養(yǎng)細胞

無血清細胞凍存液的操作規(guī)范：  1,、培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長晚期,，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài),、有無污染等,。選擇狀態(tài)良好的細胞進行凍存操作(注：貼壁生長細胞，用胰蛋白酶消化并用完全培養(yǎng)基終止消化,，進行細胞計數(shù);懸浮生長細胞,，進行細胞計數(shù))。  2,、500～1000g離心5min,，棄上清。  3,、加入適量的細胞凍存液,，重懸細胞，使細胞濃度達到1～10×106/ml,，置于凍存管中密閉,。  4、采取逐級降溫保存：4℃放置20min,，-20℃放置30min,，-70℃過夜，***置于液氮罐中長期存儲,。  注意：  務(wù)必超凈工作臺內(nèi)無菌操作,，避免污染。  雜交瘤細胞凍存時應(yīng)定期復(fù)蘇，以檢查細胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性,。杭州豬 血清培養(yǎng)細胞

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