（一）細胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液,，4℃預冷（新鮮配制的凍存液會產生大量的熱）,；取對數(shù)生長期的細胞,，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中,；離心1200rpm，6min,；去除上清液,，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數(shù),，調節(jié)凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml；將細胞分裝入凍存管中,，每管1~1.5ml,；在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名,；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min,；到達-80℃時，則可迅速放入液氮中,。細胞凍存液配制主要成分.低溫細胞凍存液配比

細胞凍存簡介生物醫(yī)學科研實驗1,、培養(yǎng)室實驗準備工作大致同細胞傳代培養(yǎng)的前6個步驟。簡言之：用紫外消毒等消毒超凈工作臺面,；清洗消毒手部,；觀察細胞；預熱培養(yǎng)用液,；點燃酒精燈,；取出巴斯德吸管、刻度吸管等插在無菌試管內,。凍存液的配置方法：按如下比例配置：10%甘油+90%培養(yǎng)基,，或者10%DMSO+90%培養(yǎng)基。用于配制凍存液的培養(yǎng)基中小牛血清濃度適量提高至20%或更高,。所用的甘油需事先高壓滅菌,，如使用DMSO，則不需要任何滅菌措施,。江蘇bi細胞凍存液保質期凍存細胞梯度降溫步驟是什么?

細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,，在培養(yǎng)器具,、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開***開始原代培養(yǎng),，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化,。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久,；細胞儲存在液氮中,，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的,。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下,，細胞內水分透出,，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷,。

細胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；2.取對數(shù)生長期的細胞,，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗。3.去除PBS,，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來,；4.離心1000rpm，5min,；5.去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數(shù),，調節(jié)凍存液中細胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml；6.將細胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5ml,；7.在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者,；8.凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min,；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min,；到-100℃時,，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內。細胞凍存為什么要慢凍?

細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境,，減少細胞代謝,，以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,，起到了細胞保種的作用,。中文名細胞凍存儲存方式將細胞放在低溫環(huán)境細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具,、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費,，而且細胞一旦離開***開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化,。因此及時進行細胞凍存十分必要,。無血清快速細胞凍存液將加有凍存液的細胞混合液分裝至凍存管中;建議沒管1ml或1.5ml.江蘇快速細胞凍存液保質期

細胞凍存液可快速冷凍，可直接置于-80℃冰箱冷凍,，長期保存，不需要程序性降溫,。低溫細胞凍存液配比

注意冷凍保護劑之品質,。DMSO應為試劑級等級，無菌且無色(以0.22micronFGLPTelflon過濾或是直接購買無菌產品,，如SigmaD-2650),，以5～10ml小體積分裝，4℃避光保存,，勿作多次解凍,。Glycerol亦應為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存,。在開啟后一年內使用,，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷,。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲，可降低細胞受損,。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化,，可換用10%甘油凍存。低溫細胞凍存液配比