LNCap細胞的培養(yǎng)和傳代嚴格由ATCC建議的操作步驟進行,，與pBabe-hygro-SSeCKs（1.5ug）和pEGFP-N3（1:1，共1.0微克）共轉染（6孔板中每孔的量）,，并用LipoD293?試劑（左圖）和FugeneHD（右圖）分別按照生產制造商的科學實驗步驟進行轉染,。轉染24小時后，用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,，以此來評價轉染效率,。在血清和***的存在下，HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉染達到95%的細胞融合,。轉染48小時后,，分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率。無論有無血清,、***存在均可獲得很高的轉染效率,。polviet轉染試劑報價

細胞轉染過程X-tremeGENE9DNA轉染試劑簡介：X-tremeGENE9DNA轉染試劑是脂質和其它成分混合而得的一類多組份試劑，溶于80%乙醇中,，經0.2μm濾膜過濾,，然后封裝于玻璃小瓶中，適用于細胞分析的多種實驗,。優(yōu)勢：1.具有細胞毒性極低,、轉染后細胞存活率高，生成可信任的生理學相關數據,。2.操作簡便,、節(jié)省時間,，只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋，再與質粒DNA共同孵育,，即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可),。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作。Opti-MEM轉染試劑分裝驚艷登場!臨床級載體生產必備轉染試劑,。

產生慢***的比較

通過 LipoD293? 試劑（升級版）和 Lipofectamine LTX（LTX）試劑將三個 cDNAs 共轉染進 293T 細胞,。一個 GFP 載體，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測定慢***的滴度,。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細胞,，其次是分別添加不同量的慢定都上清液，1 微升（上圖）和 10 微升（下圖）,。

5 天后,，細胞通過流式細胞儀檢測。右上角的數字表明轉導的細胞的百分比來測定慢***的滴度,。由 LipoD293? and LTX 產生的慢***的滴度被量化,，分為是 8x10^6 和 3x10^6 tu/ml 。

美國Polysciences公司是一家成立于1961年,，致力于特殊技精細化學試劑,、實驗室產品，單/多聚體等產品的研發(fā)供應,，所提供的產品服務于組織學（顯微技術）,、生物技術、電子技術,、護理及制藥工程等多個領域,。起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案，幫助科學家揭示未知領域,。隨后,，開拓了在病理（組織研究）應用產品，使組織除了石蠟包埋外,，還能夠包埋在塑料塊中,；開發(fā)染料和染色劑，以實現更好的樣品觀測方式,。與****合作,，開發(fā)了用于診斷試劑盒應的聚合物微球。與美國國家**中心合作,，開發(fā)天然產物分離和純化產品,，并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠，用于DNA,、蛋白質和肽的研究,。轉染后6h觀察細胞狀態(tài)，并更換培養(yǎng)基,，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細胞,，用PBS洗滌3次以上，以備RNA抽提,。

細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中**常規(guī)的研究手段,，目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內,。目前主要有三種主流方法：生物轉染,，物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用***等微生物作為基因導入載體,，以慢***,、腺***和腺相關***等**常見,，其侵染效率可以達到90%以上,，但常因安全性等問題，很多實驗室對其敬而遠之,。物理轉染主要包括顯微注射,、電穿孔和基因***，無論哪一種都需要特定的設備,，且一分錢一分貨,，性能好的價格也都很性感電轉化化學轉染方法是生物醫(yī)學研究中**常用的轉染方法，主要包括兩類：陽離子脂質體和陽離子聚合物,。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物,。試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現靶向敲低。慢病毒轉染試劑報價

每孔培養(yǎng)體積均為100μL,，細胞數目在105左右,。polviet轉染試劑報價

.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。

2.高靈活應用,， 同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗,。

3.細胞毒性低，結果相關性好,，確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導,。

4.兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，轉染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基),。

圖4. X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗,。根據各試劑說明書建議的操作流程，或標準實驗方法,，將100nM HPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,。 通過LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的熒光定量法評估基因沉默效率,。結果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉染后基因沉默表現均表現優(yōu)異。 polviet轉染試劑報價