美國Polysciences公司是一家成立于1961年,,致力于特殊技精細化學(xué)試劑,、實驗室產(chǎn)品,單/多聚體等產(chǎn)品的研發(fā)供應(yīng),,所提供的產(chǎn)品服務(wù)于組織學(xué)(顯微技術(shù)),、生物技術(shù),、電子技術(shù)、護理及制藥工程等多個領(lǐng)域。起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域,。隨后,開拓了在病理(組織研究)應(yīng)用產(chǎn)品,,使組織除了石蠟包埋外,,還能夠包埋在塑料塊中;開發(fā)染料和染色劑,,以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式,。與****合作,開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球,。與美國國家**中心合作,,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗,。繼而開發(fā)出超順磁珠,,用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究,。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步,。貼壁細胞系轉(zhuǎn)染試劑類型
LNCap細胞的培養(yǎng)和傳代嚴格由ATCC建議的操作步驟進行,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),,并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實驗步驟進行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24小時后,,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,,以此來評價轉(zhuǎn)染效率。在血清和***的存在下,,HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達到95%的細胞融合,。轉(zhuǎn)染48小時后,分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率,。polviet轉(zhuǎn)染試劑購買3.0試劑進行轉(zhuǎn)染的每個個體間所檢測的生物標志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異,。
圖3. 用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡單地混合,并進行孵育(30min),、稀釋,、及注射即可。
高效,、靶向敲低
在實驗靶標中可觀察到高達85%的敲低效果
圖4. 使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低,。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的復(fù)合物,以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進行注射,,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達85%的敲低(使用TaqMan分析對敲低進行評估),。
在難轉(zhuǎn)染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉(zhuǎn)染效率的比較
圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供
制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用 LipoD293?試劑(左圖)和 Lipofecatmine 2000(L2K, 右圖)分別將 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細胞,。轉(zhuǎn)染 24 小時后,用尼康 Eclipse 2000 熒光顯微鏡檢測 GFP 熒光,,以此來評價轉(zhuǎn)染效率,。
對難轉(zhuǎn)染細胞 LNCap 細胞轉(zhuǎn)染效率的比較
圖片由羅斯威爾公園**研究所(Roswell Cancer Institute)的 Lyn Gao 博士友情提供
賽默飛提供了多種高質(zhì)量的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品,適用于各種細胞類型的轉(zhuǎn)染,。
X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗,。優(yōu)勢:1.具有細胞毒性極低,、轉(zhuǎn)染后細胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù),。2.操作簡便,、節(jié)省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進行簡單稀釋,,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,,即可直接向細胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作.轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成,; 混勻后室溫下孵育15-20分鐘,,直接取10μL加入已鋪好細胞的孔中.國產(chǎn)轉(zhuǎn)染試劑推薦
MagTransf 磁轉(zhuǎn)染試劑實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染解析.貼壁細胞系轉(zhuǎn)染試劑類型
轉(zhuǎn)染 48 小時后,使用尼康熒光顯微鏡 GFP 熒光進行成像(左側(cè)四幅圖),,A:LipoD293,; B:293fectin;C:Xfect 和 D:Fugene 6. 帶有 6xHis 標記的 GFP 熒光蛋白使用 Ni-NTA 親和柱技術(shù)實現(xiàn)分離,。5 微升洗脫液載入 SDS-PAGE 凝膠電泳分離并進行 Coomassie 亮藍染色(右上圖 E),,道 1 為 LipoD293293、道 2 為標準蛋白分子,、道 3 為 Xfect,、道 4 為 293fectin 和道 5 為 Fugene 6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進一步定量(見右下圖 F),。產(chǎn)生慢***的比較
通過 LipoD293? 試劑(升級版)和 Lipofectamine LTX(LTX)試劑將三個 cDNAs 共轉(zhuǎn)染進 293T 細胞,。一個 GFP 載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測定慢***的滴度,。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細胞,,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1 微升(上圖)和 10 微升(下圖),。 貼壁細胞系轉(zhuǎn)染試劑類型