LNCap細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代嚴(yán)格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行,,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),,并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光,,以此來評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率,。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達(dá)到95%的細(xì)胞融合,。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,,分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)效率,。.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡單地混合,并進(jìn)行孵育(30min),、稀釋,、及注射即可。上海轉(zhuǎn)染試劑推薦
美國Polysciences公司是一家成立于1961年,,致力于特殊技精細(xì)化學(xué)試劑,、實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品,單/多聚體等產(chǎn)品的研發(fā)供應(yīng),,所提供的產(chǎn)品服務(wù)于組織學(xué)(顯微技術(shù)),、生物技術(shù)、電子技術(shù),、護(hù)理及制藥工程等多個(gè)領(lǐng)域,。起初為電子顯微鏡提供納米級(jí)樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域,。隨后,,開拓了在病理(組織研究)應(yīng)用產(chǎn)品,使組織除了石蠟包埋外,,還能夠包埋在塑料塊中,;開發(fā)染料和染色劑,以實(shí)現(xiàn)更好的樣品觀測(cè)方式,。與****合作,,開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家**中心合作,,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,,并用于紫杉醇的初步臨床試驗(yàn)。繼而開發(fā)出超順磁珠,,用于DNA,、蛋白質(zhì)和肽的研究。上海轉(zhuǎn)染試劑推薦riboFECT CP轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)用案例,可轉(zhuǎn)染各種細(xì)胞,靠譜!
基于磷酸鈣成分的轉(zhuǎn)染試劑,,其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應(yīng)形成磷酸鈣-DNA復(fù)合物,,粘附到細(xì)胞膜表面,借助內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),。pH值,,鈣離子濃度,DNA濃度,,沉淀時(shí)間,,細(xì)胞孵育時(shí)間乃至各組分加入順序都可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響,因此實(shí)驗(yàn)條件摸索和優(yōu)化時(shí)間較長,,且重復(fù)性不佳,?;谥|(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,,借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi),。目前應(yīng)用比較***的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,,而是帶負(fù)電的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,,從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面,,經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。此方法操作簡單,,重復(fù)性好,,在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率,但具有一定的細(xì)胞毒性,,可能會(huì)干擾細(xì)胞的代謝,。且活性受血清影響,需要去除血清,。
LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑 LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):高轉(zhuǎn)染效率,,適用于多種細(xì)胞系對(duì)細(xì)胞毒性低適用于DNA和RNA的轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染前無需去除細(xì)胞培養(yǎng)基或血清轉(zhuǎn)染后無需清洗細(xì)胞或更換培養(yǎng)基
1轉(zhuǎn)染效率高,適用于多種細(xì)胞系圖1. LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑以綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染幾種常見細(xì)胞系,,通過檢測(cè)GFP信號(hào)比較轉(zhuǎn)染效率,。
2細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax? ,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,,通過計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性,。 臨床級(jí)******毒載體生產(chǎn)必備轉(zhuǎn)染試劑..
細(xì)胞轉(zhuǎn)染如果以上都沒有問題,那么******重要的環(huán)節(jié)就是慢***質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞了,,轉(zhuǎn)染效果直接影響著出毒效率,,那么一款好的轉(zhuǎn)染試劑在此時(shí)就是至關(guān)重要了!在這里給大家推薦一款性價(jià)比超高的轉(zhuǎn)染試劑,,美國Polysciences家的PEIMAX40K,!PEIMAX40K(也稱為游離堿PEI22K)是一種功能強(qiáng)大,值得信賴且經(jīng)濟(jì)高效的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑,。在HEK293和CHO表達(dá)系統(tǒng)中,,能在96孔板至100L生物反應(yīng)器范圍內(nèi)提供始終如一高效的基因表達(dá)。越來越多的研究人員和公司使用PEI來替代其他類型轉(zhuǎn)染試劑,,以獲得他們所需要的優(yōu)勢(shì),。相較于其他類型轉(zhuǎn)染試劑,使用自行制備的PEI轉(zhuǎn)染試劑可以使總轉(zhuǎn)染成本降低高達(dá)40%左右,。ThomasM,,etal(2005)研究數(shù)據(jù)表明,,去乙酰化的PEI40000(PolyethylenimineMAX40000)體外質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率提高21倍,,小鼠體內(nèi)靶向效率達(dá)到10000倍,,隨之肺部特異療效顯示增強(qiáng)1500倍。mRNA細(xì)胞&***轉(zhuǎn)染試劑來助力.基因轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)
包括**常見的DNA,,用于基因編輯的siRNA,,能夠更快表達(dá)蛋白的mRNA,CRISPR-Cas9甚至是體內(nèi)轉(zhuǎn)染,。上海轉(zhuǎn)染試劑推薦
超級(jí)好用的siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑——HiPerFect高效沉默低脫靶:HiPerFect是小RNA轉(zhuǎn)染試劑,,這種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子可以在siRNA低至100pM濃度的條件下轉(zhuǎn)染(推薦濃度是1nM-5nM)。保持高效基因沉默的同時(shí)降低脫靶效應(yīng),,正是這一產(chǎn)品的精髓所在,。除了siRNA,HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和***劑的轉(zhuǎn)染,,滿足miRNA功能分析的需要,。操作簡單,方便快速:HiperFect轉(zhuǎn)染試劑的方便程度也是***的,,甚至***之內(nèi)可以完成再次接種,、轉(zhuǎn)染到檢測(cè)結(jié)果!這對(duì)于高通量反應(yīng)簡直是求之不得的福音:轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中,,培養(yǎng)基可以是含有***和血清的,,在37度培養(yǎng)箱中保溫。上海轉(zhuǎn)染試劑推薦
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