LNCap細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代嚴(yán)格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行,,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染24小時后,,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉(zhuǎn)染效率,。在血清和***的存在下,,HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達(dá)到95%的細(xì)胞融合。轉(zhuǎn)染48小時后,,分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率,。轉(zhuǎn)染是將核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞中的過程,是細(xì)胞生物學(xué),、基因表達(dá)和基因***實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟,。上海sirna轉(zhuǎn)染試劑報價
用 LipoD293? 體外 DNA 轉(zhuǎn)染試劑(Ver. II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品 Invitrogen 公司的 293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染 pEGFP-C1 質(zhì)粒到 HEK293 細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染 24 小時后,,細(xì)胞的尼康 Eclipse 熒光顯微鏡 DIC 成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè)),。
對懸浮 HEK293F 產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/
30 毫升的 293F 細(xì)胞分別使用 LipoD293?試劑、293fectin,、Xfect 和 Fugene 6 等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將 pEGFP-6xHis 質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá),,用量為 LipoD293? 試劑,20 微克,,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用 30 微克質(zhì)粒 DNA,。 上海體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑推薦隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen 顯色檢測)。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,,溶于80%乙醇中,,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,,適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn),。優(yōu)勢:1.具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高,,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù),。2.操作簡便、節(jié)省時間,,只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡單稀釋,,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可),。3.對于常用細(xì)胞無需進(jìn)行費(fèi)時費(fèi)力的優(yōu)化工作,。
轉(zhuǎn)染 48 小時后,使用尼康熒光顯微鏡 GFP 熒光進(jìn)行成像(左側(cè)四幅圖),,A:LipoD293,; B:293fectin,;C:Xfect 和 D:Fugene 6. 帶有 6xHis 標(biāo)記的 GFP 熒光蛋白使用 Ni-NTA 親和柱技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離。5 微升洗脫液載入 SDS-PAGE 凝膠電泳分離并進(jìn)行 Coomassie 亮藍(lán)染色(右上圖 E),,道 1 為 LipoD293293,、道 2 為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子、道 3 為 Xfect,、道 4 為 293fectin 和道 5 為 Fugene 6,。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量(見右下圖 F)。產(chǎn)生慢***的比較
通過 LipoD293? 試劑(升級版)和 Lipofectamine LTX(LTX)試劑將三個 cDNAs 共轉(zhuǎn)染進(jìn) 293T 細(xì)胞,。一個 GFP 載體,,pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 細(xì)胞,,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,,1 微升(上圖)和 10 微升(下圖)。 pei轉(zhuǎn)染試劑說明書是什么?
轉(zhuǎn)染是將外源核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程,,是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具,,也是大部分的生物和分子生物領(lǐng)域的科研黨們繞不開的話題。然而常常聽到的抱怨是"轉(zhuǎn)染效率太低""轉(zhuǎn)染完細(xì)胞全漂了""轉(zhuǎn)染后忘記給細(xì)胞換液了",,真所謂辛辛苦苦實(shí)驗(yàn)N多回,,一夜回到解放前……眾所周知,影響轉(zhuǎn)染成功的因素非常多,,包括細(xì)胞質(zhì)量,、核酸質(zhì)量、微生物污染,、轉(zhuǎn)染試劑等,。各種細(xì)胞使用的轉(zhuǎn)染條件都可能不同,現(xiàn)實(shí)中也并沒有一種放之四海而皆準(zhǔn)的方案,。3.0試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染的每個個體間所檢測的生物標(biāo)志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異。上海真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商
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用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡單地混合,,并進(jìn)行孵育(30min),、稀釋、及注射即可,。
靶向敲低
在實(shí)驗(yàn)靶標(biāo)中可觀察到高達(dá)85%的敲低效果
使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實(shí)現(xiàn)靶向敲低,。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的復(fù)合物,以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進(jìn)行注射,,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達(dá)85%的敲低(使用TaqMan分析對敲低進(jìn)行評估),。 上海sirna轉(zhuǎn)染試劑報價
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