LNCap細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代嚴(yán)格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),,并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光,,以此來(lái)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達(dá)到95%的細(xì)胞融合,。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,,分別通過(guò)Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)效率。每孔培養(yǎng)體積均為100μL,,細(xì)胞數(shù)目在105左右,。上海roche轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)
超級(jí)好用的siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑——HiPerFect高效沉默低脫靶:HiPerFect是小RNA轉(zhuǎn)染試劑,這種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子可以在siRNA低至100pM濃度的條件下轉(zhuǎn)染(推薦濃度是1nM-5nM),。保持高效基因沉默的同時(shí)降低脫靶效應(yīng),,正是這一產(chǎn)品的精髓所在。除了siRNA,,HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和***劑的轉(zhuǎn)染,,滿足miRNA功能分析的需要。操作簡(jiǎn)單,,方便快速:HiperFect轉(zhuǎn)染試劑的方便程度也是***的,,甚至***之內(nèi)可以完成再次接種、轉(zhuǎn)染到檢測(cè)結(jié)果,!這對(duì)于高通量反應(yīng)簡(jiǎn)直是求之不得的福音:轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)基可以是含有***和血清的,,在37度培養(yǎng)箱中保溫,。polviet轉(zhuǎn)染試劑配制隨后分離血清并檢測(cè)FVII蛋白的水平(Biophen 顯色檢測(cè))。
用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細(xì)胞中,。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,,細(xì)胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè))。對(duì)懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較30毫升的293F細(xì)胞分別使用LipoD293?試劑,、293fectin,、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá),用量為L(zhǎng)ipoD293?試劑,,20微克,,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA。
基于陽(yáng)離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑,,帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,,并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。其又分為樹枝狀陽(yáng)離子聚合物和線性陽(yáng)離子聚合物兩類,,前者細(xì)胞毒性相對(duì)較大,,后者細(xì)胞毒性較小,但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,,適用也較為廣范,。以上單一成分的轉(zhuǎn)染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細(xì)胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉(zhuǎn)染試劑,,不局限于單一成分,,混合了不同 配方的脂類(非脂質(zhì)體)、加上蛋白質(zhì)組分,、以及各種的 成分,,兼具了轉(zhuǎn)染效率高和細(xì)胞毒性小的優(yōu)勢(shì),且操作更加簡(jiǎn)單,,易于高通量,。將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細(xì)胞懸液中,前后移動(dòng)培養(yǎng)皿,,混合均勻,;
Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進(jìn)、高效的siRNA輸送解決方案,。目前尚無(wú)其他siRNA轉(zhuǎn)染試劑能夠在***的細(xì)胞系中(包括常見(jiàn)細(xì)胞類型,、干細(xì)胞、原代細(xì)胞以及歷來(lái)難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型)提供如此簡(jiǎn)便,、高效的siRNA輸送效果,。
高效
可在低siRNA濃度下獲得優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果
相對(duì)于其他的siRNA轉(zhuǎn)染試劑,Lipofectamine RNAiMAX 轉(zhuǎn)染試劑可以獲得更佳的基因***效果,。同在10 nM和1 nM p53 siRNA下,,Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑實(shí)現(xiàn)了更高的有效***細(xì)胞/未轉(zhuǎn)染細(xì)胞比率,超過(guò)其他RNAi試劑,。 連續(xù)細(xì)胞系具有無(wú)限增殖的潛能,,通常要比原代或有限細(xì)胞更易處理.原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
我們希望把mRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入原代細(xì)胞,那**適合的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品就是Lipofectamine MessengerMAX?或是Neon電轉(zhuǎn)儀,。上海roche轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)
將膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(3×105)接種至6孔板中,,然后使用riboFECTCP轉(zhuǎn)染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(DP3321,、DP7857)中,,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測(cè)siRNA***效率,。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DP3321中的siBMPER,、siCXCL10和siHOXA9表達(dá)水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,,DP7857中的siBMPER,、siCXCL10和siHOXA9表達(dá)水平分別為53.21%、47.46%和46.31%,。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以產(chǎn)生轉(zhuǎn)染混合物,。然后將混合物加入DMEM(siRNA濃度:50nM)中,,與原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)48h。RT-PCR和westernblot分析檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,。結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TREM-1siRNA后******了OGD誘導(dǎo)的TREM-1,、p-SYK、SYK,、CARD9,、p-p65和NLRP3的上調(diào)。上海roche轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)
上海儒安生物科技有限公司是一家生產(chǎn)型類企業(yè),,積極探索行業(yè)發(fā)展,,努力實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。上海儒安生物科技是一家有限責(zé)任公司企業(yè),,一直“以人為本,,服務(wù)于社會(huì)”的經(jīng)營(yíng)理念;“誠(chéng)守信譽(yù),持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針,。以滿足顧客要求為己任,;以顧客永遠(yuǎn)滿意為標(biāo)準(zhǔn);以保持行業(yè)優(yōu)先為目標(biāo),,提供***的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,,ecl發(fā)光液,cck8細(xì)胞增殖,,內(nèi)參抗體,。上海儒安生物科技自成立以來(lái),一直堅(jiān)持走正規(guī)化,、專業(yè)化路線,得到了廣大客戶及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持,。