細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用,。除此之外,，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成,，從而避免細(xì)胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min,，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。細(xì)胞凍存液配制比例是?江蘇無(wú)血清細(xì)胞凍存液配制

凍存（Cryo-preservation）是一個(gè)將細(xì)胞器,，細(xì)胞,，組織，細(xì)胞外基質(zhì),，***或者任何其他的在沒(méi)有經(jīng)調(diào)控的化學(xué)動(dòng)力學(xué)因素影響下容易受損的生物組成物,，將他們通過(guò)迅速降低到非常低的溫度來(lái)進(jìn)行保存（通常是使用固態(tài)二氧化碳的營(yíng)造-80°C條件或者是使用液氮的營(yíng)造的-196°C條件）,。在很低的溫度下，任何的酶和可能會(huì)對(duì)生物材料造成傷害的化學(xué)活躍因素都因?yàn)闇氐沫h(huán)境從而有效地解決,。,。就凍存這樣的方法而言，人們努力尋找一個(gè)合適的低溫,，這樣的溫度不會(huì)造成在結(jié)冰過(guò)程中的由于冰晶的形成從而導(dǎo)致細(xì)胞的附加傷害,，這是凍存中的頭等大事。江蘇細(xì)胞凍存液保質(zhì)期多久細(xì)胞凍存的方法與步驟?

凍存的溫度將細(xì)胞存儲(chǔ)在一個(gè)非常低的溫度下,，按理論上推斷是能讓細(xì)胞獲得極長(zhǎng)（接近無(wú)限）的壽命,，然而實(shí)際上細(xì)胞這樣的凍存有效壽命很難去證實(shí)，研究者們利用干制的種子進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)樣品被放置在不同的溫度下的時(shí)候（甚至是溫的時(shí)候）,，這些樣品會(huì)發(fā)生明顯的變化性的惡化,。當(dāng)溫度低于多元醇水溶液的玻璃轉(zhuǎn)化點(diǎn)（Tg）的時(shí)候，大約在-136°C左右,，這被認(rèn)為是能夠**降低生物活性的溫度范圍,；而當(dāng)溫度達(dá)到了-196°C（液氮的沸點(diǎn)

細(xì)胞凍存常用凍存液的成分如下：20％血清（FBS）、10％DMSO,、70％1640培養(yǎng)液,；或90％血清（FBS）、10％DMSO,，更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成,。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%,，然后濾膜過(guò)濾后分裝保存?zhèn)溆?。注意事?xiàng)：1.DMSO不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過(guò)濾除菌,。2.DMSO要用新的,而且要避光保存。3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比),。DMSO在凍存液中的作用：DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性,，分子量小、溶解度大,、易透過(guò)細(xì)胞膜,，降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲,，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮,；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點(diǎn)下降,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少冰晶損傷,。細(xì)胞凍存液可快速冷凍，可直接置于-80℃冰箱冷凍,，長(zhǎng)期保存,，不需要程序性降溫。

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細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑.江蘇無(wú)血清細(xì)胞凍存液配制

解凍解凍后,，應(yīng)該立即鋪板在預(yù)先包被好的培養(yǎng)皿中,。開始之前，提前準(zhǔn)備好以下材料：試管,，恢復(fù)至室溫的培養(yǎng)基,，預(yù)先包被的培養(yǎng)板，確保整個(gè)解凍復(fù)蘇程序可以在**短的時(shí)間內(nèi)完成,。注意：不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基,。1.在37°C水浴中快速解凍，持續(xù)溫和的在水中晃動(dòng)凍存管,，直到剩余少量細(xì)胞還處于結(jié)冰狀態(tài),。2.水浴中取出凍存管，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌,。3.用2mL的血清移液管把細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到一個(gè)15mL的錐形試管,。注意：用2mL的血清移液管代替1mL的***頭可以減少細(xì)胞聚集體的分解。江蘇無(wú)血清細(xì)胞凍存液配制

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